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第一章
植物组织培养实验室构建
第一节:商业性组织培养实验室和小工厂的设计与主要设备主要内容:实验室的设计仪器设备和器皿用具
一、实验室设计在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解,以便因地制宜地利用现有房屋,或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时,应按组织培养程序来没计,避免某些环节倒排,引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件,需要一定的设备、器材和用具,同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
2保证无菌操作,达到工作方便,防止污染。1组培实验室设计原则:
组培实验室组成:标准组织培养室包括:洗涤室(区)制备室(区)灭菌室(区)储放室(区)操作室(区)培养室(区)观察室(区)药品室(区)▼可以根据自己的实际条件进行合并
准备室:完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备:药品柜、防尘橱(放置培养容器)、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器.01洗涤、灭菌室:完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。主要设备:水池、操作台、高压灭菌锅、干燥灭菌器(如烘箱)等。02
卧
式
灭
菌
锅
无菌操作室(接种室):主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。主要设备:紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械(接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针)等。接种室宜小不宜大,一般7~8平米,要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑,易于清洁和消毒。配置拉动门,以减少开关门时的空气扰动。要求干爽安静,清洁明亮。在适当位置吊装1~2盏紫外线灭菌灯,用以照射灭菌。最好安装一小型空调,使室温可控,这样可使门窗紧闭,减少与外界空气对流。接种室应设有缓冲问,面积1m2为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋,以减少进出时带入接种室杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯,用以照射灭菌。12345
超
静
工
作
台
酸
度
计
培养室:培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。其大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜,周围墙壁要求有绝热防火的性能。主要设备:培养架(控温控光控湿)、摇床、培养箱、紫外光源等。培养材料放在由金属制成培养架上培养。培养架一般设5层,最低一层离地高约lOcm,其他每层间隔30cm左右,培养架高1.7m左右。其长度根据日光灯长度而设计,如采用40W日光灯,则长I.3m,30W的长lm,宽度一般为60cm。培养室最重要的因子是温度,一般保持在20—27℃左右,具备产热装置,并安装窗式或立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度,最好不同种类有不同的培养室。室内湿度也要求恒定,相对湿度以保持在70%~80%为好,可安装加湿器。控制光照时间可安装定时开关钟,一般需要每天光照10-16h,也有的需要连续照明。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源,这样不但可以节省能源,而且组培苗接受太阳光生长良好,驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。
细胞学实验室该室用于对培养物的观察分析与培养物的计数等。主要设备:双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜等。小型仪器设备有:分注器、血球计数器、移液枪、过滤灭菌器、电炉等加热器具、磁力搅拌器、低速台式离心机等。
显微镜显微镜
玻璃器皿培养用的:试管、三角瓶、培养皿等;显微镜下观察用的:细胞微室、载玻片、培养皿等。微孔过滤器(细胞过滤器):激素用于灭菌。一般用石棉滤膜玻璃器皿及用具
培养基的成分培养基的种类、配方及其特点培养基的配制培养基母液的配制培养基的配制主要内容:第二节:培养基及其配制
凝固剂06维生素类05植物激素(植物生长调节剂)04氨基酸和有机附加物03微量元素02大量元素01一、培养基的成分
大量元素(以Ms培养基为例)序号化学式化学名称用量mg/l1KNO3硝酸钾19002NH4NO3硝酸铵16503KH2PO4磷酸二氢钾1704MgSO4.7H2O硫酸镁3705CaCL2.4H2O二氯化钙440
微量元素(以MS培养基为例)序号化学名称化学式用量(mg/l)1碘化钾KI0.832硼酸H3BO36.23硫酸锰MnSO4.4H2O22.34硫酸锌ZnSO4.7H2O8.65钼酸钠Na2MoO4.2H2O0.256硫酸铜CuSO4.5H2O0.0257氯化钾CoCL2.6H2O0.025
氨基酸和有机附加物(以MS培养基为例)序号化学名称化学式用量(mg/l)1肌醇C6H12O6.2H2O1002甘氨酸NH2.
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