盐析注意事项选择适宜饱和度采用分步盐析盐析的成败决定于溶液.pptxVIP

盐析注意事项选择适宜饱和度采用分步盐析盐析的成败决定于溶液.pptx

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盐析注意事项选择适宜饱和度采用分步盐析盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度,稳定pH用磷酸缓冲液在加入盐时应该缓慢均匀,搅拌也要缓慢,越到后来速度应该更注意缓慢,如果出现一些未溶解的盐,应该等其完全溶解后再加盐,以免引起局部的盐浓度过高,导致酶失活。盐析后最好缓慢搅拌一个小时而且再在冰浴中放置一段时间。为了避免盐对酶的影响,一般脱盐处理后再测酶活性。盐析后的蛋白质最好尽快脱盐处理,以免变性,透析较慢,一般可用超滤

盐析注意事项硫酸铵的使用硫酸铵中常含有少量的重金属离子,对蛋白质巯基有敏感作用,使用前用H2S处理高浓度的硫酸铵溶液一般呈酸性(PH=5.0左右),使用前也需要用氨水调节至所需PH。硫酸铵容易吸潮,计算饱和度需注意

固体硫酸铵加入后体积变大加入固体盐后体积的变化已考虑在表中;盐析后一般放置半小时至一小时,待沉淀完全后才过滤或离心。过滤多用于高浓度硫酸铵溶液,因为此种情况下,硫酸铵密度较大,若用离心法需要较高离心速度和长时间的离心操作,耗时耗能。离心多用于较低浓度硫酸铵溶液。

盐析法特点:成本低,不需要特别昂贵的设备。操作简单、安全。不会引起蛋白质变性,经透析去盐后,能得到保持生物活性的纯化蛋白质。分离效果不理想,通常只是作为初步的分离纯化,还需要结合其它的纯化方法。

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