第十一章动物细胞培养基础知识【共36张PPT】.pptVIP

一、实验室设置基本实验室：准备室+接种室+培养室辅助实验室：细胞学实验室+生化分析室二、常用器具的清洗消毒方法1、清洗（1）玻璃器材：初次使用的玻璃器皿：洗涤剂/肥皂水洗涤1~5%HCl浸泡过夜蒸馏水洗2~3次使用过的玻璃器皿立即浸入水中待洗一般玻璃仪器：肥皂水/洗涤剂洗涤蒸馏水洗涤2~3次量器：铬酸洗液浸泡4~6小时蒸馏水洗涤2~3次二、常用器具的清洗消毒方法1、清洗（2）橡胶器材用过的橡胶制品：同玻璃器材的清洗二、常用器具的清洗消毒方法1、清洗（3）塑料器皿2%NaOH浸泡过夜2~5%HCl浸泡30min蒸馏水洗（4）金属器皿洗衣粉洗涤蒸馏水洗酒精棉球擦拭晾干二、常用器具的清洗消毒方法2、消毒物理：热力灭菌、电离辐射、紫外灭菌化学：重金属盐、氧化剂、表面活性剂生物：抗生素三、动物细胞培养用液培养基平衡盐其他（杂用液）（一）、培养基1、组成成分糖：葡萄糖无机离子与微量元素：如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒氨基酸：12种必需氨基酸，精氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸和缬氨酸。Ｌ型。（一）、培养基1、组成成分：维生素：至少8种，生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素Ｂ12。促生长因子及激素：如胰岛素（insulin），它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。（一）、培养基2、pH：大多数细胞的适宜pH为7.2～7.4,一般不能超过6.8~7.6。造成培养基pH波动的主要物质是细胞代谢产生的CO2,在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，培养基pH很快下降。（一）、培养基2、pH：调节：使用NaHCO3-CO2缓冲系统（合成培养基中，或Hepes），再通过稳定调节培养箱中CO2气体的浓度（5%）,使之与培养基中的NaHCO3处于平衡状态。NaHCO3＋H2O←→Na++HO-+H2O+CO2↑当[CO2]能够保持相对稳定时，上述反应就可达到平衡，[OH－]也相对恒定，即pH相对恒定。（一）、培养基3、分类天然培养基合成培养基（一）、培养基（1）、天然培养基天然培养基：主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立的早期，体外培养细胞都是利用天然培养基。天然培养基含有丰富的营养物质，渗透压、pH等也与体内环境相似，但制作过程复杂、批间差异大，因此逐渐为合成培养基所替代。目前仍然广泛使用的天然培养基是血清（serum），另外组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞时也不可缺少。（一）、培养基（1）、天然培养基血清的种类：主要是牛血清，在培养某些特殊细胞时也用人血清、马血清等。牛血清还分为小牛血清、新生牛血清和胎牛血清。一般使用的为小牛血清，小牛血清取自出生10～30天的小牛。（一）、培养基（1）、天然培养基血清的质量标准：血清质量的鉴定一般包括理化性质：如渗透压、pH，球蛋白、血红蛋白含量越低血清质量越高。微生物检测：包括细菌、真菌、支原体、病毒等促生长效果检测：克隆形成率测定法和连续传代培养测定法。国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。青霉素主要对革兰阳性菌有效，链霉素主要对革兰阴性菌有效。②无血清培养基添加组分包括以下几大类物质：一般配制为100倍浓缩液，配制时应加温至30℃，完全溶解后过滤除菌，分装至小瓶，储存于-20℃。hyorhinis）和莱氏无胆甾原体（A.①基本培养基：常用基本培养基三、培养物的污染及防止洗衣粉洗涤蒸馏水洗酒精棉球擦拭晾干血清的种类：主要是牛血清，在培养某些特殊细胞时也用人血清、马血清等。目前仍然广泛使用的天然培养基是血清（serum），另外组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞时也不可缺少。真菌污染对细胞的影响及污染物的检测laidlawii），为牛源性。另外，随着使用细胞种类增多，不同细胞交叉污染，尤其是Hela细胞的污染也时有发生，从而造成细胞不纯。3mg／L或200U／mL，pH6.物理：热力灭菌、电离辐射、紫外灭菌（一）、培养基（1）、天然培养基血清的使用与储存：大部分血清在使用之前必须经过灭活处理，即56℃放置30分钟。（灭活的目的是去除血清中的补体成分，避免补体对细