狂犬病病毒P和M蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究.docxVIP

狂犬病病毒P和M蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究

一、引言

1.1研究背景与意义

狂犬病（Rabies）是一种由狂犬病病毒（Rabiesvirus，RABV）引起的急性、致死性中枢神经系统传染病，是一种人兽共患的自然疫源性疾病。狂犬病病毒属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病毒属（Lyssavirus），是一种嗜神经性病毒，主要通过感染动物的唾液传播，一旦发病，病死率几乎为100%，严重威胁人类和动物的生命健康。据世界卫生组织（WHO）统计，全球每年约有5.9万人死于狂犬病，平均每9分钟就有1人因狂犬病死亡，其中95%以上的病例发生在亚洲和非洲等发展中国家。在中国，狂犬病也是一种严重的公共卫生问题，近年来虽然狂犬病的发病率有所下降，但每年仍有数百人死于狂犬病，给社会和家庭带来了沉重的负担。

狂犬病病毒为单股负链RNA病毒，其基因组长度约为12kb，编码5种主要蛋白，分别为核蛋白（Nucleoprotein，N）、磷蛋白（Phosphoprotein，P）、基质蛋白（Matrixprotein，M）、糖蛋白（Glycoprotein，G）和依赖RNA的RNA聚合酶（RNA-dependentRNApolymerase，L）。这些蛋白在病毒的生命周期中发挥着重要作用，其中P蛋白和M蛋白是狂犬病病毒感染过程中的两个重要蛋白。

P蛋白是一种非结构蛋白，分子量约为37kDa，由297个氨基酸组成。P蛋白在病毒基因组复制、转录和调控等进程中发挥着关键作用，它可以与病毒的N蛋白、L蛋白相互作用，形成核糖核蛋白复合物（RNP），参与病毒的转录和复制过程。此外，P蛋白还可以与宿主细胞的多种蛋白相互作用，调节宿主细胞的信号通路，促进病毒的感染和复制。研究表明，P蛋白可以抑制宿主细胞的干扰素信号通路，逃避宿主的免疫监视，从而有利于病毒的生存和传播。

M蛋白是一种包膜蛋白，分子量约为25kDa，由202个氨基酸组成。M蛋白在病毒粒子的组装、出芽和释放过程中发挥着重要作用，它可以与病毒的G蛋白、N蛋白相互作用，形成病毒的包膜结构，参与病毒的感染和繁殖过程。此外，M蛋白还可以与宿主细胞的细胞膜相互作用，调节宿主细胞的膜结构和功能，促进病毒的入侵和释放。研究表明，M蛋白可以调节宿主细胞的自噬小体，促进病毒的出芽和释放，从而有利于病毒的传播和扩散。

由于狂犬病的高致死率和无特效治疗药物，目前狂犬病的防控主要依赖于疫苗接种和暴露后预防。然而，现有的狂犬病疫苗和诊断试剂存在一些不足之处，如疫苗的免疫效果不理想、诊断试剂的灵敏度和特异性不高等，限制了狂犬病的防控效果。因此，寻找新的狂犬病疫苗和诊断试剂靶点，开发更加有效的狂犬病防控技术，具有重要的现实意义。

多克隆抗体（Polyclonalantibody，pAb）是指由多个B淋巴细胞克隆产生的针对不同抗原决定簇的抗体混合物。多克隆抗体具有制备简单、成本低、特异性强等优点，在疾病的诊断、治疗和预防等方面具有广泛的应用。制备狂犬病病毒P蛋白和M蛋白的多克隆抗体，可以用于狂犬病病毒的检测、诊断和疫苗研发等领域，为狂犬病的防控提供有力的技术支持。

综上所述，本研究旨在利用原核表达系统表达、纯化狂犬病病毒P蛋白和M蛋白，并制备多克隆抗体，为狂犬病的诊断、预防和治疗提供新的思路和方法，具有重要的理论意义和实际应用价值。

1.2国内外研究现状

在狂犬病病毒P和M蛋白研究方面，国内外学者已取得一定成果。P蛋白作为非结构蛋白，在病毒基因组复制、转录和调控中发挥关键作用。国外研究发现，P蛋白与病毒的N蛋白、L蛋白相互作用，形成核糖核蛋白复合物，参与病毒的转录和复制过程，其还能与宿主细胞的多种蛋白相互作用，调节宿主细胞的信号通路，促进病毒的感染和复制。国内研究也表明，P蛋白可以抑制宿主细胞的干扰素信号通路，逃避宿主的免疫监视，从而有利于病毒的生存和传播。

对于M蛋白，作为一种包膜蛋白，在病毒粒子的组装、出芽和释放过程中发挥着重要作用。国外有研究表明，M蛋白可以与病毒的G蛋白、N蛋白相互作用，形成病毒的包膜结构，参与病毒的感染和繁殖过程。国内研究也指出，M蛋白可以与宿主细胞的细胞膜相互作用，调节宿主细胞的膜结构和功能，促进病毒的入侵和释放。华中农业大学动物医学院狂犬病研究团队在CellReports杂志发表研究成果，揭示了丽莎病毒属M蛋白抑制NLRP3炎症小体活化的机制，发现RABV的M蛋白能够与NLRP3直接相互作用，利用分子对接进行互作蛋白结构的模拟发现RABVM蛋白能够与NEK7分子竞争性结合NLRP3分子来抑制其第二阶段