第2章工业微生物的菌种选育.pptVIP

高剂量：致死率90%-99.9%变异幅度大，但负变株多低剂量：致死率75%-80%负变株少，且突变菌株稳定2）诱变剂量的选择第30页，共59页，星期日，2025年，2月5日3.筛选根据步骤可以分为初筛和复筛初筛菌株的量要大，发酵和测试的条件都可粗放些，采用一个菌种进一个摇瓶的方法进行初筛复筛对发酵和测试条件要求应逐步提高，复筛一般每个菌株进3~5个摇瓶，如果生产能力继续保持优异，再重复筛选几次。初筛和复筛均要有亲株作对照比较生产能力是否优良。复筛后的优良菌株要考查其稳定性、菌种特性和最适培养条件第31页，共59页，星期日，2025年，2月5日根据操作方法可分为随机筛选和理性化筛选随机筛选理性化筛选从产物形成的生理生化途径着手，进行有的放矢的筛选。如营养缺陷型、抗性突变株等。经过诱变处理后，进行平板分离，随机挑选单菌落，筛选高产菌株第32页，共59页，星期日，2025年，2月5日1）摇瓶筛选法单菌落→传种斜面→模拟发酵瓶→测定发酵能力2）琼脂块筛选法打孔取块→鉴定平板测定发酵能力→(须经摇瓶复筛)随机筛选第33页，共59页，星期日，2025年，2月5日3）筛选自动化和筛选工具微型化第34页，共59页，星期日，2025年，2月5日96孔板高通量孵育筛选第35页，共59页，星期日，2025年，2月5日营养缺陷型菌株筛选理性化筛选所谓营养缺陷型菌株是微生物经诱变剂处理后产生的一种生化突变体。由于基因突变，它失去了合成某种物质（氨基酸、维生素或核苷酸碱基）的能力，在基本培养基上不能生长，大多数营养缺陷型菌株需要补加一定种类的有机物质后才能生长。第36页，共59页，星期日，2025年，2月5日1）筛选用培养基⑴基本培养基：凡是能满足某种野生型菌株营养要求的最低成分的合成培养基，称为基本培养基；常以‘[-]’表示；⑵在基本培养基中加入一些富含氨基酸、维生素及含氮碱基之类的天然有机物质如蛋白胨、酵母膏等，以满足该微生物的各种营养缺陷型菌株都能生长繁殖的培养基，称为完全培养基，常用‘[+]’表示；⑶在基本培养基中只是有针对性地加入某一种或某几种营养缺陷成分，以满足相应的营养缺陷型生长的培养基，称为补充培养基，补充培养基可按所加入营养成分相应地用‘[A]’、‘[B]’等来表示。第37页，共59页，星期日，2025年，2月5日2）营养缺陷型菌株筛选的一般方法（1）诱变剂处理（2）淘汰野生型菌株①抗生素法②菌丝过滤法（3）检出营养缺陷型（4）鉴定营养缺陷型第38页，共59页，星期日，2025年，2月5日检出营养缺陷型①夹层培养法②限量补充培养法③影印接种法④逐个检出法第39页，共59页，星期日，2025年，2月5日将突变菌株放到完全致死的环境中，一次性筛出抗性突变株。包括：抗生素、金属离子、温度、噬菌体①抗生素抗性突变：提高产量；②抗噬菌体突变：消除噬菌体污染；③条件抗性突变：如温度，可提高产量；抗性突变株筛选第40页，共59页，星期日，2025年，2月5日培养基发酵条件4.突变菌株高产基因的表达第41页，共59页，星期日，2025年，2月5日制备菌悬液细菌要处于对数生长期，此时，生长状态同步，生理活性一致，细胞浓度较高。霉菌、放线菌要用孢子。保证菌悬液均匀用玻璃珠振荡，使细胞均匀分散。维持一定的细胞浓度真菌和酵母一般是106-107个/毫升，放线菌和细菌是108个/毫升。举例（紫外线育种）第42页，共59页，星期日，2025年，2月5日诱变单细胞悬液放置于培养皿中，放入无菌搅拌子。将培养皿置于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器和培养皿盖，打开紫外灯，计时。培养达到要求时间后，盖上培养皿盖，在红外灯下稀释分离，涂平板，用黑布包扎，在适当温度下培养。诱变最有效的波长是260nm左右（253－265nm），紫外灯的功率为15W，距离固定在30cm左右。第43页，共59页，星期日，2025年，2月5日一、定义和特点二、原理三、常规的杂交育种：准性生殖方式杂交四、原生质体融合技术第四节杂交育种技术第44页，共59页，星期日，2025年，2月5日杂交育种一般是指两个不同基因型的菌株通过接合或原生质体融合使遗传物质重新组合，再从中分离和筛选出具有新性状的菌株。一、定义和特点定向杂交后对诱变剂敏感—消除诱变效应饱和改变产品质量和产量操作复杂，技术要求高，推广和应用受限特