蛋白质的理化性质及分离分析.pptVIP

沉降的概念沉降速率：v=dx/dt沉降常数与单位应用：沉降速度法测定分子量的原理；梯度离心分离蛋白质（氯化铯）；五、蛋白质的沉降作用第31页，共47页，星期日，2025年，2月5日六、蛋白质的颜色反应1.双缩脲反应2.茚三酮反应3.考马斯亮蓝G2504.福林酚试剂反应5.黄色反应--芳香族氨基酸的特有反应6.米伦氏反应—酪氨酸的特有反应7.乙醛酸反应—色氨酸的特有反应8.坂口反应—精氨酸特有的反应第32页，共47页，星期日，2025年，2月5日六、蛋白质的颜色反应1.双缩脲反应两分子双缩脲与碱性硫酸铜作用，生成粉红色复合物含有两个或两个以上肽键的化合物，能发生同样反应肽键的反应，肽键越多颜色越深，粉红，紫红，蓝紫受蛋白质特异性影响小蛋白质定量测定；测定蛋白质水解程度第33页，共47页，星期日，2025年，2月5日第1页，共47页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的理化性质一、两性性质及等电点二、胶体性质三、变性与复性作用四、蛋白质的沉淀作用五、沉降作用六、蛋白质的颜色反应七、蛋白质的紫外吸收性质第2页，共47页，星期日，2025年，2月5日一、蛋白质的两性解离与等电点蛋白质分子中氨基酸残基的侧链上存在游离的氨基和羧基，因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解离性质，具有特定的等电点（pI）。溶液pH＝pI时，蛋白质所带正负电荷相等；pH＞pI时，蛋白质带净负电荷；pH＜pI时，蛋白质带净正电荷。第3页，共47页，星期日，2025年，2月5日等电点时特点：（1）净电荷为零（2）一定离子强度的缓冲液：等离子点特征常数（3）多数蛋白质在水中等电点偏酸碱性AA/酸性AA等电点胃蛋白酶0.21.0血红蛋白1.76.7细胞色素C2.910.7菊糖酶0.348.2（4）导电性、溶解度、黏度及渗透压都最小。等电沉淀和蛋白电泳：迁移率与净电荷量、分子大小、分子形状等有关第4页，共47页，星期日，2025年，2月5日带电粒子在电场中移动的现象称为电泳（electrophoresis）。电泳：What’selectrophoresis?一、蛋白质的两性解离与等电点第5页，共47页，星期日，2025年，2月5日蛋白质分子在一定pH的溶液中可带净的负电荷或正电荷，故可在电场中发生移动。不同蛋白质分子所带电荷量不同，且分子大小也不同，故在电场中的移动速度也不同，据此可互相分离。一、蛋白质的两性解离与等电点第6页，共47页，星期日，2025年，2月5日二、蛋白质的胶体性质蛋白质分子的颗粒直径已达1~100nm，处于胶体颗粒的范围。（亲水胶体）蛋白质具有胶体溶液的性质：布朗运动、丁道尔现象、不能透过半透膜、具有吸附力等。1、蛋白质具有胶体溶液的性质第7页，共47页，星期日，2025年，2月5日二、蛋白质的胶体性质2、稳定蛋白质亲水溶胶的两个重要因素：水化膜----通过氢键与水结合表面电荷----在非等电点状态下，双电层，带同性电荷蛋白质分子互相排斥。第8页，共47页，星期日，2025年，2月5日蛋白质颗粒的表面电荷和水化膜+++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质++++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用第9页，共47页，星期日，2025年，2月5日3.蛋白质凝胶凝胶作用：蛋白质颗粒周围的水膜是不均匀,使它们以一定的部位结合形成长链。这些长链又彼此结合成为复杂的网状结构的凝胶体。溶胶：蛋白质作为分散相，水为连续相形成的溶液。凝胶：蛋白质为连续相，水为分散相形成的网状凝胶体。二、蛋白质的胶体性质第10页，共47页，星期日，2025年，2月5日3.蛋白质凝胶凝胶具有胀润作用：分类：（1）可逆性凝胶（2）不可逆性凝胶部分破坏水化膜、适当加热和远离等电点4.蛋白质胶体性质的应用渗析（透析）超滤二、