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幽门螺杆菌NapA蛋白重组乳酸乳球菌的构建与小鼠免疫功效探究

一、引言

1.1研究背景与意义

幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，Hp）是一种主要生存在人的胃部及十二指肠内的革兰氏阴性菌，呈螺旋状或S形、弧形。自1982年澳大利亚学者Warren和Marshall首次从人胃黏膜中成功分离出幽门螺杆菌以来，它与人类健康的紧密联系逐渐浮出水面。这种细菌在全球范围内广泛传播，感染率居高不下，已然成为一个不容忽视的公共卫生问题。

幽门螺杆菌感染与多种严重的胃部疾病息息相关。它是慢性胃炎的主要致病因素，长期的幽门螺杆菌感染可导致胃黏膜反复发炎，引发上腹痛、腹胀、餐后饱胀、食欲减退、嗳气等消化不良症状，严重影响患者的生活质量。若感染未得到及时有效的控制，病情进一步发展，十二指肠溃疡或胃溃疡也会随之而来，患者常出现餐后上腹部饱胀、不适或疼痛等症状，给患者带来极大的痛苦。更为严峻的是，幽门螺杆菌感染还是胃癌的重要诱因。世界卫生组织国际癌症研究机构早已将幽门螺杆菌（感染）列为一类致癌物，幽门螺杆菌感染者中有1%-2%会发展成胃癌。从幽门螺杆菌感染引发的慢性胃炎，到胃黏膜萎缩、异型增生，最终演变为胃癌，这一疾病进展过程严重威胁着人类的生命健康。此外，幽门螺杆菌感染还与胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等疾病的发生密切相关。

目前，临床上针对幽门螺杆菌感染主要采用质子泵抑制剂和抗生素联合治疗的方案。然而，随着抗生素的广泛使用，幽门螺杆菌的耐药性问题日益严重，甲硝唑、克拉霉素等常用抗生素的耐药率在部分地区显著上升，这使得治疗效果大打折扣。同时，抗生素治疗还存在病人依从性差的问题，多种药物联合使用的复杂疗程和可能出现的不良反应，如恶心、呕吐、腹痛、腹泻等，使得许多患者难以坚持完成整个治疗过程，进而导致治疗失败和疾病复发。据统计，传统抗生素治疗方案的失败率在一些地区已经达到了相当高的比例，这使得寻找新的防治方法迫在眉睫。

疫苗作为一种高效、低成本的预防手段，在传染病防治领域发挥着举足轻重的作用。对于幽门螺杆菌感染而言，研发安全、有效的疫苗具有极其重要的意义。预防性疫苗可在儿童出生后的几年内接种，有效预防幽门螺杆菌感染，从源头上降低感染率，减少相关疾病的发生风险。治疗性疫苗则可以在感染后的任何时期接种，通过增强机体的免疫应答，帮助患者消除幽门螺杆菌，预防疾病的进一步发展，降低胃癌等严重疾病的发生几率。

中性粒细胞激活蛋白（Neutrophil-activatingprotein，NAP）作为幽门螺杆菌的重要毒力因子，由napA基因编码，具有独特的生物学特性。它对中性粒细胞、单核细胞有趋化作用，能够导致中性粒细胞浸润胃黏膜，并诱导中性粒细胞NADPH氧化酶激活，产生活性氧中间产物，引发黏膜炎症和组织损伤。同时，NAP抗原性强，大多数幽门螺杆菌感染患者体内会产生针对NAP的抗体，用NAP免疫小鼠能保护机体抵抗幽门螺杆菌的感染，保护率可达80%，这表明NAP具备作为幽门螺杆菌疫苗候选抗原的潜力。

乳酸乳球菌（Lactococcuslactis）是一种革兰氏阳性菌，在食品工业中应用广泛，并且是全球公认安全的微生物（Generallyregardedassafe，GRAS）。近年来，乳酸乳球菌作为基因工程宿主菌，在递呈病毒、细菌抗原等方面展现出独特的优势，常被用于构建活菌疫苗。它能够在胃肠等黏膜部位黏附、定植，且无病原性，以其作为载体表达外源抗原用于黏膜免疫，可有效激发机体的免疫反应，为幽门螺杆菌疫苗的研发提供了新的思路和途径。

本研究致力于构建表达幽门螺杆菌NapA蛋白的重组乳酸乳球菌，并对其在小鼠体内的免疫效果进行评价。通过深入研究，有望开发出一种新型的幽门螺杆菌疫苗，为幽门螺杆菌感染的防治提供新的有效手段，降低幽门螺杆菌感染相关疾病的发生率，改善患者的健康状况，具有重要的理论意义和实际应用价值。

1.2国内外研究现状

幽门螺杆菌疫苗的研发一直是国内外学者关注的焦点。国外早在幽门螺杆菌被发现后不久，便开启了相关疫苗的研究征程。早期研究多集中在全菌疫苗，如用超声破碎或福尔马林灭活菌体获得全菌抗原免疫小鼠，虽能引起高效的局部黏膜反应，降低幽门螺杆菌在胃内的定殖，但由于抗原成分复杂，易引发免疫性疾病，限制了其临床应用。随着研究的深入，以尿素酶、鞭毛、毒力因子等单一成分为抗原的疫苗成为研究热点。例如，尿素酶因其氨基酸序列相对保守且广泛分布于幽门螺杆菌表面，被视为重要的疫苗候选抗原。国外有研究将尿素酶与其他抗原分子结合制备混合抗原免疫小鼠，免疫效率有所提高。然而，这些单一抗原疫苗在临床试验中仍面临诸多挑战，如免疫保护效果不够理想、难以诱导持久的免疫应答等，导致至今全球范围内尚无幽门