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基于胶体金免疫层析技术的旋毛虫快速检测试纸条研制与性能评估

一、引言

1.1研究背景与意义

旋毛虫（Trichinellaspiralis）是一种严重危害养殖业和人类健康的寄生虫，其引发的旋毛虫病是一种重要的人畜共患寄生虫病。当人或动物摄入含有旋毛虫活幼虫包囊的肉类后，幼虫在肠道内脱囊而出，发育为成虫，成虫交配后产生的新生幼虫又会随血液循环侵入横纹肌，形成具有感染性的幼虫包囊，从而完成整个生活史。

在养殖业中，猪、犬、猫等家畜感染旋毛虫的情况较为常见。一旦家畜感染，不仅会影响其生长发育、降低肉品质量，导致养殖经济效益受损，严重时还可能造成家畜死亡。据相关统计，在一些旋毛虫病流行较为严重的地区，猪的感染率可达10%-30%，这给养猪业带来了巨大的经济损失。同时，感染旋毛虫的家畜作为传染源，也增加了人类感染旋毛虫病的风险。

旋毛虫病对人类健康的威胁更为严重。人体感染旋毛虫后，早期可出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等胃肠道症状，随着病情发展，幼虫移行至肌肉，会引发发热、肌肉疼痛、乏力、水肿等症状，严重影响患者的生活质量。在重度感染的情况下，还可能累及心脏、肺脏、中枢神经系统等重要器官，导致心肌炎、肺炎、脑炎等严重并发症，甚至危及生命。例如，在某些因食用未煮熟的感染旋毛虫猪肉而引发的群体性旋毛虫病事件中，部分患者出现了严重的并发症，病死率高达5%-10%。

目前，针对旋毛虫的检测方法众多，如传统的显微镜检查法，需将肌肉组织制成薄片后在显微镜下查找幼虫，但该方法操作繁琐、耗时长，且对检测人员的经验要求较高，漏检率也相对较高；传统PCR技术虽灵敏度较高，但对实验设备和操作技术要求严格，且易出现假阳性或假阴性结果；ELISA（酶联免疫吸附试验）虽具有一定的特异性和灵敏度，但检测过程较为复杂，需要专业的仪器设备和技术人员，不适用于现场快速检测。这些传统检测方法存在时间耗费长、操作复杂、灵敏度有限和特异性不高等缺点，无法满足实际生产和公共卫生检测对快速、简便、准确检测旋毛虫的需求。因此，开发一种快速、简便、准确、经济、高效且灵敏的检测方法迫在眉睫。

免疫金标单克隆抗体试纸条技术作为一种新型的免疫检测技术，具有操作简便、快速、无需特殊仪器设备、结果直观等优点，在病原体检测领域展现出巨大的应用潜力。本研究旨在研制旋毛虫免疫金标单克隆抗体试纸条，为旋毛虫的快速检测提供一种新的有效手段，这对于及时发现旋毛虫感染、防控旋毛虫病在养殖业中的传播、保障动物源性食品安全以及维护人类健康都具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

旋毛虫病的检测技术研究历经了漫长的发展过程，国内外众多学者在此领域进行了大量探索，不断推动检测技术的革新与进步。

早期，显微镜检查法是检测旋毛虫的主要手段。1835年，伦敦医学生Paget首次从人体中发现旋毛虫，此后显微镜检查法逐渐成为检测旋毛虫的常规方法。该方法通过将肌肉组织制成薄片，在显微镜下直接查找旋毛虫幼虫。如我国在肉品检验中，常从每头猪横膈膜肌脚各取一小块肉样，先肉眼观察，再剪取24个小肉粒压片后镜检。这种方法虽操作相对简单，不需要复杂的仪器设备，但存在诸多局限性。由于旋毛虫幼虫在肌肉组织中的分布并不均匀，检测时容易出现漏检情况，尤其是在旋毛虫感染早期，幼虫数量较少时，漏检率更高。而且，该方法对检测人员的经验要求极高，需要检测人员能够准确识别旋毛虫幼虫的形态特征，不同检测人员之间的检测结果可能存在较大差异，在实际应用中受到一定限制。

随着科学技术的不断发展，免疫学检测技术逐渐兴起。其中，酶联免疫吸附试验（ELISA）是应用较为广泛的一种免疫学检测方法。1971年，Ruitenberg和Saunders率先将ELISA用于猪旋毛虫病的诊断。此后，ELISA技术不断改进和完善。我国学者许威光等在1988年改良了抗原的制备方法，获得了旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原（ES抗原），改变了以往使用粗抗原的状况，大大提高了检测的准确性，用这种ES抗原建立的诊断方法，检出率约在95％以上，基本消除了假阴性结果，此项研究成果已被列入国家检疫规程。ELISA技术利用抗原-抗体的特异性结合原理，通过酶标记物催化底物显色来检测样品中的旋毛虫抗体或抗原，具有较高的灵敏度和特异性。然而，该技术检测过程较为繁琐，需要经过包被、封闭、加样、孵育、洗涤、显色等多个步骤，整个检测过程耗时较长，一般需要数小时甚至更长时间。而且，ELISA检测需要专业的仪器设备，如酶标仪等，对实验环境和操作人员的技术水平要求也较高，这限制了其在基层和现场检测中的应用。

免疫荧光抗体技术（IFAT）也是一种重要的免疫学检测方法。它以荧光素标记抗体，与待检样品中的抗原结合，在荧光显微镜下观察，根据荧光的出现与否来判断样