肥料用海藻提取物通用生产流程、典型生产工艺参数示例、海藻多糖的检测.docxVIP

附录A

（资料性）

肥料用海藻提取物通用生产流程

A.1肥料用海藻提取物通用生产流程见图A.1。

注：代表必要工序，代表可选工序

图A.1肥料用海藻提取物通用生产流程图

附录B

（资料性）

典型生产工艺参数示例

B.1肥料用海藻提取物酶解生产典型工艺参数

表B.1不同藻类酶解工艺优化参数

藻种

推荐酶组合

酶活力要求

温度(℃)

pH

料液比

时间(h)

得率(%)

褐藻

纤维素酶+褐藻胶裂解酶

≥5000U/g+≥3000U/g

45-55

5.5-6.5

1:8-1:12

6-10

≥65

红藻

木聚糖酶+卡拉胶酶

≥4000U/g+≥2000U/g

50-60

6.0-7.0

1:6-1:10

5-8

≥58

绿藻

纤维素酶+果胶酶

≥4500U/g+≥3500U/g

40-50

4.5-5.5

1:5-1:8

4-6

≥62

注1：酶组合添加比例为纤维素酶:褐藻胶裂解酶=3:1（w/w），木聚糖酶:卡拉胶酶=2:1（w/w），纤维素酶:果胶酶=3:1（w/w）。

注2：得率指海藻多糖提取率，按苯酚-硫酸法测定。

B.2关键控制点说明

B.2.1酶解终点判定

当相对分子量≤2000Da的海藻多糖≥60%，或粘度下降率≥80%（旋转粘度计测定，25℃）即为酶解终点。

B.2.2工艺调整建议

高盐藻类处理（如马尾藻）：增加1%EDTA预处理（去除离子干扰），酶解温度提高2-3℃。

低活性原料：补加0.1%中性蛋白酶（提升细胞壁破壁效率）。

B.3不同干燥方式参数对照

表B.2干燥工艺对多糖保留率的影响

干燥方式

温度控制(℃)

水分残留(%)

多糖保留率(%)

喷雾干燥

进风180±5/出风90±2

≤4.5

≥85

真空干燥

60±2（真空度0.09MPa）

≤3.0

≥92

冷冻干燥

-45℃升华/25℃解析

≤2.0

≥95

B.4异常情况处理

问题现象

可能原因

解决方案

得率低于50%

酶失活或pH失控

1.检测酶活力

2.校准pH计

产物褐变严重

美拉德反应

1.控制温度≤55℃

2.添加0.5%亚硫酸氢钠

附录C

（规范性）

海藻多糖的检测

C.1原理

海藻多糖在酸性条件下水解，水解产物在硫酸的作用下，迅速脱水生成糠醛衍生物，并与苯酚反应生成橙黄色溶液，反应产物在490nm处比色测定，标准曲线法定量。

C.2试剂

所用试剂除另有说明外，均为分析纯试剂。

C.2.1水为GB/T6682中规定的三级水。

C.2.2浓硫酸。

C.2.3苯酚。

C.2.4葡萄糖：纯度≥98%。

C.2.550g/L苯酚溶液：称取5g苯酚，用水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，摇匀，置于4℃冰箱中避光贮存。

C.2.60.1mg/mL葡萄糖标准储备溶液：称取葡萄糖0.01g（精确至0.0001g），用水溶解并定容至100mL容量瓶中，摇匀，置于4℃冰箱中避光保存。

C.3仪器

C.3.1分光光度计。

C.3.2分析天平：感量0.0001g。

C.3.3涡漩混合器。

C.4分析步骤

C.4.1标准曲线的制定

精确吸取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL葡萄糖标准溶液（C.2.6），分别置于干燥试管中，用蒸馏水补至1.0mL。依次向试管中加入1.0mL苯酚溶液（C.2.5），5.0mL硫酸（C.2.2，快速加入，与液面垂直，勿接触试管壁，以便充分混合），静置10min。涡旋振荡混匀，然后将试管放置于30℃水浴中反应20min，490nm处测吸光度。以葡萄糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，制作标准曲线。

C.4.2样品的测定

称取待测试样0.100g于烧杯中，加200mL水搅拌溶解，转移至250mL容量瓶中，定容，摇匀，吸取1mL于20mL具塞试管中，按C.4.1步骤操作，测定吸光度。

C.5计算结果

样品中海藻多糖含量按照C.1式进行计算，结果保留三位有效数字:

……（C.1）

式中：

X——样品中海藻多糖的含量，单位为百分率（%）；

m1——从标准曲线上查得的样品溶液的含糖量，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V——样品定容的体积，单位为毫升（mL）；

m——样品的质量，单位为克（g）。

C.6重复性

两个平行样品检测结果的相对偏差不得大于5%。

附录D

（规范性）

海藻多糖相对分子质量

D.1原理

以不同相对分子质量的右旋糖酐对照品作为对照，采用凝胶色谱法（GPC）测定海藻多糖的相对分子质量。

D.2试剂

所用试剂除另有说明外，均为分析纯试剂。

D.2.1水为GB/T6682中规定的三级水。

D.2.2右旋糖酐对照品，相对分子质量（