DB15T 4111-2025 洋葱、大蒜病毒RT-PCR检测技术规程.docxVIP

ICS65.020.01CCS

ICS

65.020.01

CCS

B04

内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准

DB15/T4111—2025

洋葱、大蒜病毒RT-PCR检测技术规程

CodeofpracticeforRT-PCRdetectionofvirusesinonionandgarlic

2025-07-10发布 2025-08-10实施

内蒙古自治区市场监督管理局 发布

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DB15/T4111—2025

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC25）归口。

本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古中天现代农牧业开发有限责任公司、呼和浩特市农牧技术推广中心、乌拉特前旗农牧和科技局。

本文件主要起草人：李正男、张磊、孙平平、张称心、郑莎、徐文俊、苏敏、韩静宇、曹海、云梅、赵栓、郭孟泽。

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DB15/T4111—2025

洋葱、大蒜病毒鉴定技术规程

范围

本文件规定了洋葱、大蒜病毒检测中的术语和定义、检测对象、抽样、取样、检测方法和判定规则等内容。

本文件适用于洋葱、大蒜的病毒检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T34265 Sanger法测序技术指南

GB/T40974 核酸样本质量评价方法

SN/T2497.21 进出口危险化学品安全试验方法第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

RNA病毒 RNAviruses

核糖核酸病毒，其遗传物质为RNA。

反转录 Reversetranscription（RT）

以RNA为模板，逆转录酶催化合成DNA的过程。

互补DNA ComplementaryDNA（cDNA）

由逆转录酶催化合成的、与RNA模板互补的DNA。

聚合酶链式反应 Polymerasechainreaction（PCR）

利用DNA聚合酶，对DNA或cDNA模板的特定区域进行体外扩增的技术。反应混合物通常由DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸、引物和缓冲液组成，反应过程主要包括变性、退火和延伸三个步骤。

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引物 primers

人工合成的具有一定长度的单链DNA分子，与DNA模板链的特定区域互补，其3’末端在PCR过程中作为复制延伸的起始位点。

检测对象

主要洋葱RNA病毒

黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）。

韭葱黄条病毒（Leekyellowstripevirus，LYSV）。洋葱黄矮病毒（Onionyellowdwarfvirus，OYDV）。

胡葱黄条病毒（Shallotyellowstripevirus，SYSV）。

主要大蒜RNA病毒

黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）。大蒜病毒A（GarlicvirusA，GarV-A）。

大蒜病毒B（GarlicvirusB，GarV-B）。大蒜病毒D（GarlicvirusD，GarV-D）。大蒜病毒E（GarlicvirusE，GarV-E）。大蒜病毒X（GarlicvirusX，GarV-X）。

大蒜潜隐病毒（Garliclatentvirus，GLV）。

韭葱黄条病毒（Leekyellowstripevirus，LYSV）。洋葱黄矮病毒（Onionyellowdwarfvirus，OYDV）。

取样

取样方法

采用5点法抽样。

种植面积小于667m2（含667m2），抽检100株。种植面积为667m2到6670m2（含6670m2），首个667m2抽100株，之后每增加667m2增检50株。超过6670m2，前6670m2按上述方法抽样，之后每增加667m2增检20株。

取样方法

对样方内的所有洋葱、大蒜进行采样。折取地上部的叶、花苔等作为检测样品，折取的样品应立即检测或液氮速冻后置于-80℃超低温保存箱保存。采样点距离检测点较远时，应将洋葱、大蒜整株挖出，运到检测点。

检测方法

样品核酸提取

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选择市售的用于提取含有多糖多酚材料RNA的试剂盒，按照试剂盒自带的说明书进行操作。核酸质量评价按照GB/T40974执行。

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