DB45_T2172-2020_甘蔗黑穗病的鉴定方法PCR法_广西壮族自治区 conv.docxVIP

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B16 DB45广西壮族自治区地方标准

DB45/T2172—2020

甘蔗黑穗病的鉴定方法PCR法

MethodofPCRmethodfordetectionofsugarcanesmut

DB45/T2172—2020

目 次

前言...............................................................................II

1 范围..............................................................................1

2 规范性引用文件....................................................................1

3 术语和定义........................................................................1

4 缩略语............................................................................1

5 原理..............................................................................2

6 材料和试剂........................................................................2

7 仪器和设备........................................................................3

8 引物..............................................................................3

9 操作步骤..........................................................................3

10 结果判定.........................................................................4

附录A（资料性） 样品检测电泳图......................................................5

DB45/T2172—2020

前

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则

起草。

言

第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

本文件由广西壮族自治区分析测试研究中心提出并宣贯。本文件由广西糖业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：广西益谱检测技术有限公司、广西博测检测技术服务有限公司、广西吉锐安全技

术有限公司、广西壮族自治区分析测试研究中心。本文件主要起草人：梁俊、苏丽梅、刘守廷、龙智翔、黄易勤、黄小娟、刘月东、刘巧频、杨振媚、

黄芳、朱玉连、韦秀兰。

DB45/T2172—2020

甘蔗黑穗病的鉴定方法PCR法

1 范围

本文件规定了甘蔗黑穗病的PCR检测方法。本文件适用于甘蔗组培苗、种苗、种茎及大田植株黑穗病菌的分子检测及判定。

2 规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求

3 术语和定义

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5 原理

甘蔗黑穗病病原菌产生孢子，分布在甘蔗植株内外，通过提取甘蔗黑穗病孢子的DNA，设计特定引物，利用PCR检测技术对甘蔗黑穗病DNA进行体外扩增检测，可得到准确的鉴定结果。

6 材料和试剂

除另有说明外，本文件中使用分析纯（含）以上试剂，用水符合GB/T6682规定的二级水，涉及PCR用水要求达到一级水指标。

6.1 试剂

6.1.1 三羟甲基氨基甲烷（C4H11NO3）：纯度＞99%。6.1.2 乙二胺四乙酸二钠（EDTA·2Na）：纯度≥99.0%。6.1.3 硼酸（H3BO3）：ρ=1.43g/cm3，含量≥99.5%。

6.1.4 十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）：ρ=1.32g/mL，纯度≥99.0%。6.1.5 氯化