第四章细胞培养与代谢调控.pptVIP

一、酶水平的调节酶水平调节酶活性调节（酶结构调节）变（别）构调节快速调节（微调）酶合成的诱导与阻遏长期调节（粗调节）酶含量调节（基因表达水平调节）化学修饰调节酶的降解（一）酶活力的调节**第30页，共47页，星期日，2025年，2月5日别构效应物别构激活剂——别构激活（正反馈）——增加活性别构抑制剂——别构抑制（负反馈）——降低活性底物、产物或ATP、ADP、AMP等1反馈抑制：限速酶受其代谢体系终产物的抑制。**第31页，共47页，星期日，2025年，2月5日**第32页，共47页，星期日，2025年，2月5日代谢物别构中心活性中心反馈调节中酶活性调节的机制**第33页，共47页，星期日，2025年，2月5日第1页，共47页，星期日，2025年，2月5日一、细胞培养概述细胞培养是指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌、适当条件下使其生长繁殖一种技术。细胞培养的对象是单个细胞或细胞群。细胞培养影响的环境因素：营养、pH、渗透压、溶解氧、光照、剪切力等。第2页，共47页，星期日，2025年，2月5日1、细胞培养发展简史及有关概念1907年，美国生物学家哈里森将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，保持存活了几周，并观察了神经突起的生长现象。被称为“细胞（组织）培养之父”。Carrel1912年提出无菌操作技术，1923年又设计了卡氏培养瓶。现在，细胞培养技术已经成为现代医学研究中的一项重要的手段。近年来，细胞培养技术在细胞生物学、分子生物学、遗传学、药理学、免疫学、老年学、肿瘤学和病毒学以及临床各学科领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕成果。第3页，共47页，星期日，2025年，2月5日1）细胞培养（cellculture）是指将组织取出后，用化学或物理的方法，将其分散成单个细胞在体外条件下进行培养。细胞在培养的过程中不再形成组织。培养物是单个细胞或细胞群。从广义上讲，体外(invitro)培养包括所有结构层次的培养，即器官培养、组织培养和细胞培养。2)组织培养（tissueculture）指从体内取出组织，在体外模拟体内生理条件，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。此时可能有组织分化并保持组织的结构与功能。培养物是组织碎块或器官的一部分。第4页，共47页，星期日，2025年，2月5日3）器官培养（organculture）指器官的胚芽、整个器官在体外条件下的保存或生长，此时亦能有器官的分化并保持器官的立体结构和功能。实际上，在体外培养时，无论采用什么方法和条件，培养的主要成份仍然是细胞。另外，细胞培养也并不意味着细胞彼此是独立的，细胞在培养中的生命活动和体内细胞一样，仍然是相互依存，呈现一定的“组织”特性。所以组织培养和细胞培养并无严格区别，常用作同义语使用。第5页，共47页，星期日，2025年，2月5日4）原代培养(primaryculture)将机体取出的细胞或组织进行实效（立即）培养的过程，又称初培养。初培养的细胞大约增殖10代左右，这样的细胞称为原代细胞。5）传代培养(passageculture)指从原代培养的细胞继续转接培养，又称继代培养。第6页，共47页，星期日，2025年，2月5日6）细胞系（cellline）由原代培养产生的能进行无限次传代培养的细胞群即成细胞系。此时细胞发生了遗传突变，染色体呈亚二倍体或非整倍体，失去接触抑制特性。目前常用的细胞系有：3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）；CHO（正常中国仓鼠卵巢细胞）；L（小鼠肿瘤细胞）；BHK（叙利亚仓鼠肾）；Hela（人宫颈癌细胞)7）细胞株（cellstrain）原代培养细胞能顺利传代，且保持原来染色体的二倍体数量和接触抑制行为，把这种传代细胞称为细胞株。8）克隆（clone）又称无性繁殖系或无性系，指由一个细胞或共同祖先通过有丝分裂所产生的遗传特性一致的细胞群或生物群，亦指DNA片段群第7页，共47页，星期日，2025年，2月5日二、细胞培养的操作方式根据细胞培养时营养成分添加以及培养液与细胞收集方式的不同，细胞培养有：分批式、流加式、半连续式、连续式和灌流式5种操作方式。第8页，共47页，星期日，2025年，2月5日1、分批式培养分批培养是指细胞和培养基一次性加入到培养容器或生物反应器内进行培养，在培养过程中培养液体积不变，不添加营养成分，待细胞增长和产物积累到适当时间，一次性收获细胞、产物和培养液的方法。特