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重组弹性蛋白rhELT的制备及其抗敏性质研究

目录

一、文档概要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.2弹性蛋白概述及其生物学功能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.3重组蛋白技术进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.4过敏性疾病现状及治疗挑战．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

1.5本研究的立题依据与研究目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.1实验材料与试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

2.1.1主要实验菌株与细胞系．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.1.2关键试剂与试剂盒．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

2.1.3主要仪器设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

2.2重组弹性蛋白rhELT的表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

2.2.1表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

2.2.2重组蛋白的诱导表达与初步纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

2.2.3重组蛋白的复性与进一步纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

2.2.4重组蛋白的鉴定与表征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

2.3实验动物模型建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.3.1实验动物选择与饲养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

2.3.2过敏动物模型的建立方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

2.4抗敏性质研究方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

2.4.1皮肤过敏性试验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

2.4.2细胞因子水平检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

2.4.3免疫器官指数测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

2.4.4免疫病理学观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

2.4.5差异蛋白组学分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

三、结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

3.1重组弹性蛋白rhELT的表达与纯化结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

3.1.1重组表达载体的构建与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

3.1.2重组蛋白的诱导表达与可溶性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

3.1.3重组蛋白的纯化效果与纯度鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

3.1.4重组蛋白的生化特性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

3.2重组弹性蛋白rhELT的抗敏作用研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

3.2.1重组蛋白对过敏性模型动物皮肤反应的影响．．．．．．．．．．．．．．44

3.2.2重组蛋白对过敏性模型动物血清细胞因子水平的影响．．．．．．46

3.2.3重组蛋白对过敏性模型动物免疫器官指数的影响．．．．．．．．．．50

3.2.4重组蛋白对过敏性模型动物免疫病理学改变的影响．．．．．．．．51

3.2.5重组蛋白抗敏作用的分子机制探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52

四、讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

4.1重组弹性蛋白rhELT的表达与纯化讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54

4.2重组弹性蛋白rhELT抗敏作用机制探讨