生物化学ppt第三章第二节.pptVIP

原理：一般的多肽链太长，含有几百甚至几千个氨基酸残基。故先将它切割成若干个小肽段，然后再分别测定小肽段的氨基酸顺序。多肽链的降解必须满足两个条件：选择性强，反应产率高；主要方法：酶解法和化学法；?酶解法:某些蛋白质水解酶能够选择性地水解多肽链中某一肽键，因而能预测出可能得到的小肽段数目，以及端基氨基酸的类型。常用的酶：胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，羧肽酶和氨肽酶多肽链的选择性降解3.多肽链氨基酸顺序分析第60页，共122页，星期日，2025年，2月5日?化学法：溴化氰水解法(Cyanogenbromide)：它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。特点：专一性强，产率高。多肽链的选择性降解第61页，共122页，星期日，2025年，2月5日多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸。在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。末端基氨基酸测定第62页，共122页，星期日，2025年，2月5日Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP）。在酸性条件下水解，得到黄色DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不同的DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。末端基氨基酸测定?二硝基氟苯（DNFB）法第63页，共122页，星期日，2025年，2月5日在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与N-端氨基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰-氨基酸。此法的优点是丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度可以达到1?10-9mol。末端基氨基酸测定?丹磺酰氯法第64页，共122页，星期日，2025年，2月5日此法是多肽链C-端氨基酸分析法。多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。末端基氨基酸测定?肼解法第65页，共122页，星期日，2025年，2月5日氨肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的N-端逐个的向里水解。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残基顺序。最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮氨酸残基为N-末端的肽链速度最快。末端基氨基酸测定?氨肽酶法第66页，共122页，星期日，2025年，2月5日羧肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的C-端逐个的水解。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而知道蛋白质的C-末端残基顺序。目前常用的羧肽酶有四种：A,B,C和Y；A和B来自胰脏；C来自柑桔叶；Y来自面包酵母。羧肽酶A能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸残基；B只能水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键。末端基氨基酸测定?羧肽酶法第67页，共122页，星期日，2025年，2月5日Edman法（苯异硫氰酸酯法）实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。Edman氨基酸顺序分析法PTCPTC-多肽PTH-氨基酸PTH：苯乙内酰硫脲+第68页，共122页，星期日，2025年，2月5日多肽氨基酸顺序自动分析仪工作原理第69页，共122页，星期日，2025年，2月5日3.5.2蛋白质的三维结构蛋白质分子的多肽链并非呈线形伸展，而是折叠和盘曲构成特有的比较稳定的空间结构。蛋白质的生物学活性和理化性质主要决定于空间结构的完整，因此仅仅测定蛋白质分子的氨基酸组成和它们的排列顺序并不能完全了解蛋白质分子的生物学活性和理化性质。例如球状蛋白质(多见于血浆中的白蛋白、球蛋白、血红蛋白和酶等)和纤维状蛋白质(角蛋白、胶原蛋白、肌凝蛋白、纤维蛋白等)，前者溶于水，后者不溶于水，显而易见，此种性质不能仅用蛋白质的一级结构的氨基酸排列顺序来解释。第70页，共122页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的三维结构就是指蛋白质的二级、三级和四级结构。如下图：

第71页，共122页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的二级(Secondary)结构是指肽链的主链原子在空间的排列,或规则的几何走向、旋转及折叠。涉及肽链主链的构象及链内或链间形成的氢键。不涉及侧链部分的构象1．蛋白质的二级结构第72页，共122页，星期日，2025年，2月5日①肽键平面(或称酰胺平面，amideplane)Pauling等人对一些简单的肽及氨基酸的酰胺等进行了X线衍射分析，得出下图所示结构：(1)肽键中的C-N键长0