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CHO表达体系的清除工艺

于CHO表达系的生物技术产品的具有存在污染的性，这种污染会在临床中导

致严重，污染可能于原细胞系本身，也可能来自生产过程中偶然带入的外源，

为了保证生物技术制品的安全，需要在生产过程中对进行消除和灭活以降低每剂量中的

样颗粒含量至一定标准。

1.消除方法

包括膜过滤和柱层析法等，前者通过孔径大小，对消除倾向于的有效；后

者根据和目标蛋白在填料中的不同结合或流穿方式，从而消除蛋白溶液中的。

1.1膜过滤

可分为直流过滤技术和切向流过滤技术，前者通过深度孔径使蛋白分子与颗粒得到

有效分离，如图1所示；后者通过表面孔径使蛋白分子与颗粒得到有效，如

图2所示。但膜过滤只对滤膜的孔径比有效直径小才能有效消除，一般来说不能

单独使用，需要与其他方法联合使用。

图1直流过滤模式

图2切向流过滤模式

1.2柱层析法

柱层析法根据蛋白质的理化性质的不同进行蛋白分离纯化，从而达到分离杂蛋白及消除

等污染物的问题，柱层析法包括亲和层析、离子交换、反相层析等。

2.灭活方法

只有能够部分破坏结构或活性，并维持生物技术药化性质及生物学活性的方法才是

最理想的方法，例机溶剂/去污剂（S/D）处理灭活、低pH孵育法灭活，

2.1、去污剂（S/D）处理灭活

如磷酸三丁酯（TnBP）和非离子化的去污剂如TritonX-100或吐温80结合可以灭活

脂包膜，但对非脂包膜无效，S/D处理前需先用1µm或更小孔径的滤器去除蛋白

溶液可能存在的颗粒（颗粒可能藏匿从而影响灭活效果），加入S/D后需确保是均

一的混合物，灭活全过程应将温度控制在规定的范围内。如果加入S/D后立刻过滤，则

需检测过滤后S/D的浓度是否发生变化，变化应进行调整。

2.2低pH孵育法灭活

当使用低pH条件灭活时，灭活条件如pH、孵育时间、温度、蛋白质浓度、目标蛋白中

的分散形式等均会影响灭活效果。

3.类型

虽然目前以逆转录的清除能力作为抗体或者融合蛋白的清除验证指标，只有达到指

标，方能进入一期临床实验（FDA,1997），并且每种在早期和后期除验证时的使用

频率不同，在IND阶段，逆转录、细小和疱疹处于主导地位。但在NDA和BLA

阶段，会使用3-5种模型，使用呼肠孤、小核糖、多瘤等其他种类的

比例会增加。

对于表1中所含四种的性质在不同的书中展示的pI或大小会有差异，但基本一致。包

膜表面为重复的蛋白质和糖蛋白，主要由对称的二十面体壳组成，由于结构单一，所以

这些包膜具有类似的行为特点，但是不太确定体积、硬度以及对称性的改变会不会影响

不同包膜的性质。

表1常用性质

类型性质pI

X-MuLV逆转录包膜，，6.0-6.7

ssRNA80-120nm

MVM细小无包膜，ss