绵羊肺炎支原体P110_LppT黏附素家族保守区的原核表达和免疫原性分析.pdfVIP

中国兽医杂志２０２３ꎬ５９(６):２９￣３７

ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ

绵羊肺炎支原体Ｐ１１０/ＬｐｐＴ黏附素家族

保守区的原核表达和免疫原性分析

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徐春光ꎬ郝永清ꎬ刘波ꎬ高明华ꎬ李艳

(１呼伦贝尔学院农学院ꎬ内蒙古呼伦贝尔０２１００８ꎻ２内蒙古农业大学兽医学院ꎬ内蒙古呼和浩特０１００１８ꎻ

３榆林市羊产业发展中心ꎬ陕西榆林７１９０００)

摘要:绵羊肺炎支原体(Ｍｏ)ＮＭ２０１０株的Ｐ１２０蛋白与猪肺炎支原体(Ｍｈｐ)的黏附素Ｐ１１０高度同源ꎬ同属于Ｐ１１０/

ＬｐｐＴ黏附素Ｎ端结构域家族ꎮ为了筛选用于研制广谱绵羊支原体肺炎疫苗的保护性抗原ꎬ本试验利用生物信息学方法对

ＭｏＮＭ２０１０株Ｐ１２０蛋白的保守区段、结构、Ｂ细胞抗原表位进行预测分析ꎬ并对Ｐ１２０基因的Ｎ端和Ｃ端２个保守区基因片

段进行克隆、表达、可溶性分析和抗原特性分析ꎻ２个表达产物分别对兔进行免疫试验ꎬ用ＥＬＩＳＡ方法检测免疫兔血清抗体

效价和ＩＬ￣２、ＩＬ￣４、ＩＬ￣１０和ＩＦＮ￣γ细胞因子浓度ꎮ结果显示ꎬＰ１２０蛋白Ｎ端有信号肽和１个跨膜螺旋ꎬ亚细胞定位在外膜ꎬ

可能是一种外膜蛋白ꎬＰ１２０蛋白Ｎ端和Ｃ端２个保守区段均有较多Ｂ细胞线性抗原表位ꎬ具有较好的抗原性ꎻ经序列测定

证实ꎬ合成的Ｐ１２０￣Ｎ和Ｐ１２０￣Ｃ２个基因片段的基因序列完全正确ꎬ长度分别为１５０９ｂｐ和７４１ｂｐꎬ表达的重组蛋白分子质

量分别为５８１ｋＤａ和２９５ｋＤａꎻＰ１２０蛋白Ｎ端以可溶和包涵体２种形式存在ꎬＣ端以包涵体形式存在ꎬ均具有良好的抗原

性ꎻ新西兰大白兔经４次免疫后ꎬ重组蛋白Ｐ１２０￣Ｎ组和重组蛋白Ｐ１２０￣Ｃ组兔血清中均产生了特异性抗体ＩｇＧꎬ效价分别为

１∶５１２０００和１∶１２８０００ꎻ与阴性对照组相比ꎬ重组蛋白Ｐ１２０￣Ｎ组和重组蛋白Ｐ１２０￣Ｃ组兔血清中ＩＬ￣２、ＩＬ￣４、ＩＬ￣１０和ＩＦＮ￣γ

浓度均极显著升高(Ｐ００１)ꎮ结果表明ꎬ重组蛋白Ｐ１２０￣Ｎ和Ｐ１２０￣Ｃ可以诱导试验动物机体的体液免疫反应ꎬＰ１１０/ＬｐｐＴ

黏附素家族保守区可以作为广谱绵羊支原体肺炎疫苗的候选蛋白ꎮ

关键词:绵羊肺炎支原体ꎻＰ１１０/ＬｐｐＴ黏附素家族ꎻ保守区ꎻＰ１２０ꎻ生物信息学分析ꎻ原核表达ꎻ抗原性ꎻ免疫原性

中图分类号:Ｓ８５２６２ꎻＳ８５８２６文献标志码:Ａ文章编号:０５２９６００５(２０２３)０６００２９０９

ＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＣｏｎｓｅｒｖｅｄＲｅｇｉｏｎｏｆ

Ｐ１１０/ＬｐｐＴＡｄｈｅｓｉｎＦａｍｉｌｙｉｎＭｙｃｏｐｌａｓｍａｏｖｉｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ

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ＸＵＣｈｕｎ￣ｇｕａｎｇꎬＨＡＯＹｏｎｇ￣ｑｉｎｇꎬＬＩＵＢｏꎬＧＡＯＭｉｎｇ￣ｈｕａꎬＬＩＹａｎ

(１ＳｃｈｏｏｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＨｕｌｕｎｂｕｉｒＣｏｌｌｅｇｅꎬＨｕｌｕｎｂｕｉｒ０２１００８ꎬＣｈｉｎａꎻ２ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ

ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＨｏｈｈｏｔ０１００１８ꎬＣｈｉｎａꎻ３ＹｕｌｉｎＳｈｅｅｐＩｎｄｕｓｔｒｙＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｅｎｔｅｒꎬＹｕｌｉｎ７１９０００ꎬＣｈｉｎａ)

Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＴｈｅＰ１２０ｐｒｏｔｅｉｎｏｆＭｙｃｏｐｌａｓｍａｏｖｉｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ(Ｍｏ)ＮＭ２０１０ｓｔｒａｉｎｉｓｈｉｇｈｌｙｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｗｉｔｈｔｈｅａｄｈｅｓｉｎＰ１１０ｏｆ