野猪DHX36解旋酶酶学特性及保守性分析.pdfVIP

ISSN1007-7626中国生物子生物学报nttp.edu.cn2022年12月

CN11-3870/0ChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiology38(12):1681~1693

D0I:10.10mb.2022.09.1289

DHX36角

野猪解旋酶酶学特性及保守性分析

徐思颖，享

郭海磊，奚绪光

（西北农林科技大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室，陕西，杨凌712100）

摘要DHX36解旋酶（DEAH-boxhelicase36）在生物体内广泛存在，可作为外源核酸传感器广

泛参与机体免疫反应，因其对G-四链体具有高度亲和性和解旋活性而备受关注。目前已报道了

3个物种DHX36解旋酶的三维结构，但其酶学活性的保守性研究鲜见报道。本文以哺乳动物野

猪（Susscrofa)DHX36解旋酶（SsDHX36）为研究对象，通过生物化学与生物物理研究技术系统

研究了其酶学性质，并对比其与低等无脊椎动物黑腹果蝇（Drosophilamelanogaster）DHX36解旋

酶（DmDHX36）的活性，探究DHX36在物种间的功能保守性。本研究通过原核表达系统，分离

纯化得到了纯度大于95%的SsDHX36解旋酶；利用荧光偏振和快速停留技术得到SsDHX36的

最佳酶学反应条件，发现SsDHX36对G4DNA具有平行构型的亲和选择性，对富含鸟嘌呤的

SsDNA具有结合和解旋的底物偏好性；结合单分子荧光共振能量转移技术对SsDHX36和

DmDHX36进行活性比较，发现两者与G4DNA结合的构型选择性和对富含鸟嘌呤DNA的底物

偏好性是保守的。但两者对不同序列长度ssDNA的亲和性差异显著，SsDHX36受序列长度影响

较大且亲和力随序列长度的增加而增强，而DmDHX36则完全相反。本文克隆纯化了SsDHX36

解旋酶并研究了其酶学活性，着重分析了SsDHX36和DmDHX36的功能保守性，为理解DHX36

的保守功能机制，探究基于DHX36与富含鸟嘌呤序列互作的免疫反应酶学活性基础和靶向药

物设计提供了理论与实验基础。

关键词野猪DHX36解旋酶；G-四链体；酶学活性；底物偏好性；功能保守性

中图分类号Q71

EnzymaticCharacteristicsandAnalysisoftheSusScrofaDHX36HelicaSe

XUSi-Ying,GUOHai-Lei,XIXu-Guang

(DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology,CollegeofLifeSciences,NorthwestAFUniversity,

Yangling,Shaanxi712100,China)

AbstractTheDEAH-boxhelicase36

exogenousnucleicacidsensorinvolvedintheimmuneresponse.Ithasattractedconsiderableattention

duetoitshighaffinityandunwindingactivityforG-quadruplexes.Thethree-dimensionalstructuresof

DHX36helicasesfromthreespecieshavebeenreported,butthestudyoftheirconservedenzymat