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先天性甲状腺功能减退症新致病候选基因NOTCH2功能研究

摘要

congenitalhypothyroidism,CH

目的：先天性甲状腺功能减退症（）是一种常见可预防的

致儿童智力低下的内分泌疾病，全球发病率约1:2000至1:3000。CH患儿会出现新生

CH

儿黄疸延长、嗜睡、行动迟缓、便秘、脐疝、低张力和呆小症等。如果患儿及时

治疗，智力可基本正常，否则会导致生长迟缓和永久性智力残疾。因此，早期诊断及

CHCH

治疗对新生儿健康至关重要。遗传因素是公认的致病原因之一，且仍有许多

CH致病基因有待被发现。在前期工作中通过全外测序等筛选NOTCH2为CH新致病

候选基因，本研究通过靶向测序技术对前期工作中筛选的NOTCH2基因进行遗传学放

大验证，确定中国人群CH患儿NOTCH2基因突变的特点。对NOTCH2杂合错义突变

c.4400CT/p.S1467Fc.4585TC/p.W1529RCH

和进行细胞功能学研究，发现其对可

能的致病机制，为CH的早期诊断与治疗提供理论依据。

618CH100

方法：通过靶向测序对名河南患儿和名正常人群进行遗传学放大验证，

并对放大验证中新发现的变体进行蛋白保守性和危害性分析。随后对NOTCH2错义突

c.4400CT/p.S1467Fc.4585TC/p.W1529RNOTCH2

变和进行细胞功能学研究。构建

野生质粒，对其诱导点突变，将空载组、野生组和突变组质粒分别转染至甲状腺细胞

系Nthy-ori3-1细胞中，通过荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹实验检测每组NOTCH2

mRNA和蛋白质的表达水平。再通过细胞划痕实验、transwell实验、细胞增殖实验检

测突变组对细胞迁移和增殖的影响。通过双荧光素酶报告基因实验检测突变型

NOTCH2对NOTCH2-RBPJK信号通路的影响。

结果：

1、对618名河南CH患儿靶向测序，在6名患儿中发现5个NOTCH2变体

c.1274AG/p.N425Sc.2042TA/p.I681Nc.2225AC/p.K742Tc.6295AG/p.M2099V

，，，，

c.6893GA/p.R2298Q。通过生物信息学分析发现，5个变体均位于蛋白保守区域，变

N425SK742TR2298QNOTCH2CH

体、和分别有不同程度的危害性。基因在中国患

儿中的突变率大约为0.84%。

22c.4400CT/p.S1467Fc.4585TC/p.W1529R

、对前期发现的个杂合错义突变、进

行细胞功能学研究。突变体对人甲状腺细胞中NOTCH2mRNA及蛋白表达的影响：

NOTCH2错义突变S1467F和W1529R均导致mRNA的表达量下降；W1529R引起

NOTCH2蛋白表达降低，而S1467F对蛋白表达量未出现明显影响。突变体对甲状腺细

胞迁移功能的影响：NOTCH2错义突变W1529R对细