临床病理基本知识及病理学常用技术PPT课件.ppt

？？？**？？？*ER阳性Her-2阳性*影响免疫组化检测阳性率的关键因素1、标本固定标本一定要及时、充分固定固定液：4%甲醛固定时间：24～48小时为佳2、抗体效价3、实验操作技术*电镜：目前电镜在病理诊断中仅用于肾脏疾病（肾小球肾炎）的诊断以及对一些小细胞性肿瘤的鉴别诊断。核酸原位杂交：对一些病毒抗原的检测，如EBV、HPV等*生物芯片技术组织芯片又称组织微阵列（tissuemicroarray），是将数十个、数百个乃至上千个小的组织蜡块整齐地排列在一个特制蜡块上，从而形成微缩的组织切片的技术。其特点是①体积小，信息含量高；②高效、快速、低消耗（节时、省力、少材）。适用于科研。****纤维肉瘤腹膜后去分化脂肪肉瘤恶性神经鞘瘤单相型滑膜肉瘤*软骨肉瘤去分化软骨肉瘤去分化软骨肉瘤*卵巢Krukenberg瘤*间变性淋巴瘤*黑色素瘤*乳腺浸润性导管癌*三、标本的固定（一）固定的意义保存细胞结构：使各种酶灭活，防止组织自溶；促进各种化学成分在原位凝固沉淀。（二）固定的时机越快越好，最好不要超过离体后2小时*（三）固定液种类和选择1．4%甲醛适用于手术及活检标本固定；配制：1份体积市售福尔马林（40％甲醛）加9份体积缓冲液（pH7.4）2．95%酒精适用于细胞涂片、刷片固定3．4%戌二醛适用于电镜标本固定4．特殊固定液，如糖原固定液，等*（四）固定液的量大于标本的4倍体积或固定液水平面高于标本（五）固定时间：一般3～24h（六）哪些标本不必固定？术中冰冻检查标本；肾穿刺标本；免疫荧光、某些免疫组化检查标本；肌病标本*四、病理标本的长期保存根据不同的目的采用不同的标本保存方法：液体保存：如大体标本石蜡包埋：所有活检标本，最常用塑料包埋：如骨髓穿刺标本液氮保存：如需提取DNA、RNA的标本低温冰箱（低于-20℃保存）*五、病理标本制作及报告的基本过程中华医学会临床技术操作规范(2004年)规定病理报告于标本送达病理科后5个工作日内发出第一天：肉眼检查、取材，固定、脱水、浸蜡。第二天：石蜡包埋，切片，染色，初验第三天：复验，发出病理报告第四、五天：复杂疑难病例需会诊及补取材，进行特殊检查（如免疫组化、特染等）*取材*固定、脱水、浸蜡*包埋*切片*贴片*HE染色*封片*阅片诊断*六、病理报告的形式1.明确的疾病诊断报告：如胃腺癌、宫颈息肉等；2.基本明确的诊断报告：如炎症性病变、恶性肿瘤，但需进一步检查确定分类或分型；3.不能完全肯定或有所保留的诊断：常采用描述形式加上“考虑为…可能性大/倾向于/较符合”等字样。此种的病理报告只能作为临床的重要参考！！！*4.描述性诊断：如血块、坏死物、仅见少许上皮成分等；5.否定性报告：如组织过小、严重变形导致无法诊断*疾病（病变）肿瘤非特异性炎症特异性炎症(肉芽肿性炎)原发间叶性上皮性良性恶性继发上皮性良性恶性间叶性肿瘤炎症*七、病理报告阴性或差错的原因1）取材失当2）制片质量差3）病理医生经验不足或阅片匆忙草率4）疾病形态的复杂性和病理检查的局限性若病理报告与临床不符，临床与病理医生必须沟通、讨论。正确评价病理科的功过。*病理学技术*1.组织化学2.免疫组织化学（IHC）3.电子显微镜4.基因芯片、蛋白芯片、组织芯片5.激光显微切割（LMD）6.原位分子杂交（ISH）、荧光原位分子杂交（FISH）7.比较基因组杂交（CGH）*一、组织化学原理：利用组织或细胞内的化学成分与外加的化学试剂进行化学反应或酶底物反应(显色反应)。普鲁士蓝反应*Masson三色嗜银染色*二、免疫组织化学免疫组织化学是在免疫学和组织化学的基础上发展起来病理学技术，其原理是用特异性的单克隆或多克隆抗体检测组织切片中存在相应抗原。*特异性抗体在适当条件下与组织切片中的抗原结合后，通过标记在抗体分子上的酶将显色剂氧化，显色物质沉淀在抗原抗体结合的部位从而显示抗原所在的位置(细胞膜、细胞核、胞浆)，并根据染色的强弱判断抗原的多寡。*基本原理与方法