分光光度技术.ppt

第三节分光光度技术的应用一、测定溶液中物质的含量可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。比色法：这需要测定标准溶液(浓度已知的溶液)和未知液(浓度待测定的溶液)的吸光度，将两者进行比较。由于所用吸收池的厚度是一样的，可用下式进行计算。?Ax/As=KCxL/KCsL，即：Cx=Ax×Cs/As式中Cx代表未知液的浓度，Cs代表标准液的浓度，Ax和As分别代表未知液和标准液所测得的吸光度值，式中只有Cx是未知的，可由上式计算得之。第29页，共41页，星期日，2025年，2月5日分光度法：可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线.然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处：①灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异；②可以避免其他物质的干扰。?第30页，共41页，星期日，2025年，2月5日二、用紫外光谱鉴定化合物使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制吸光度—波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。第31页，共41页，星期日，2025年，2月5日关于分光光度技术第1页，共41页，星期日，2025年，2月5日第一节光学原理把电磁波按频率大小，从频率最小的无线电波到频率最大的γ射线排列，既为电磁波的波谱电磁波谱第2页，共41页，星期日，2025年，2月5日当光线通过某种物质的溶液时，透过光的强度会减弱。因为它分成了三部分：一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分被组成此溶液的物质所吸收，其余便是透过光的强度。即：入射光=反射光+分散光+吸收光+透过光“空白”校正：在检测过程中，若用蒸馏水或待测溶液的溶剂作为“空白”校正反射、分散等因素所造成的入射光的损失，则：入射光(I。)=吸收光+透过光(I)第3页，共41页，星期日，2025年，2月5日分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的技术。吸收光谱（absorptionspectrum）即物质对不同波长光的吸收程度不同而产生的光谱。分子对各个波长的光吸收程度不同，这是分子的结构特性所决定的。第4页，共41页，星期日，2025年，2月5日物质所发射的光是具有波粒二象性：微粒性波动性E为光子的能量；ν为光波的频率（Hz）；h为普朗克常数（6.626）；c为光速（2.9977×108m／s）；λ为光波的波长光波具有一定的频率。不同单色光的颜色不同，即因其频率不同所致。不同频率的光波在真空中的传播速度相同。根据光的速度(c)和频率(v)可计算出它的波长(入)第5页，共41页，星期日，2025年，2月5日S2S1S0S3E2E0E1E3h?物质的吸收光谱:在连续光谱中某些波长的光被物质吸收后产生的光谱被称作吸收光谱,包括分子吸收光谱和原子吸收光谱。吸收光谱取决于物质的结构。第6页，共41页，星期日，2025年，2月5日从一个有连续光谱的光源，逐步地分出各个波长的光，使其透过待测物的真溶液，测出其在不同波长时的光密度；然后以波长为横坐标，光密度为纵坐标，就可以得到待测物的吸收光谱曲线；由此找出其中吸收最强的波长，作为灵敏光波长对该物质未知液液进行定量测定。曲线1-细菌叶绿素a；曲线2-叶绿素a；曲线3-叶绿素b；曲线4-藻胆红素；曲线5-β-类胡萝卜素第7页，共41页，星期日，2025年，2月5日朗伯-比尔定律：I0：入射光强度C:溶液浓度b:液层厚度I:透射光强度T:透光度A:吸光度k:吸光系数bI0I第8页，共41页，星期日，2025年，2月5日朗伯-比尔定律的适用条件：1.入射光为单色光。波长范围越大，单色光纯度越低，偏离越大；2.溶液中邻近分子的存在并不改变每一给定分子的特性，即分子