色谱分析法概论.ppt

*一根色譜柱n=103以上，組分有微小的分配係數(容量因數)差別即可實現完全分離。 分配係數(容量因數)不等是分離的前提。*

(二)流出曲線方程

1、二項式分佈曲線 以組分A在柱出口處的品質分數對N作圖。*分配色譜法洗脫順序由組分在固定相或流動相中溶解 度的相對大小而決定。正相液液分配色譜：極性強的組分後被洗脫。 （庫侖力和氫鍵力）反相液液分配色譜：極性強的組分先出柱。*二、吸附色譜法分離原理利用被分離組分對固定相表面吸附中心吸附能力的差別而實現分離。吸附過程是試樣中組分的分子(X)與流動相分子(Y)爭奪吸附劑表面活性中心的過程，即為競爭吸附過程。**吸附係數與吸附劑的活性、組分的性質和流動相的性質有關。*吸附色譜法固定相多為吸附劑，如矽膠、氧化鋁。矽膠表面矽醇基為吸附中心。經典液相柱色譜和薄層色譜：一般矽膠高效液相色譜：球型或無定型全多孔矽 膠和堆積矽珠。氣相色譜：高分子多孔微球等*吸附色譜法流動相有機溶劑（矽膠為吸附劑）洗脫能力：主要由其極性決定。強極性流動相佔據吸附中心的能力強，洗脫能力強，使k值小，保留時間短。Snyder溶劑強度?o：吸附自由能，表示洗脫能力。?o值越大，固定相對溶劑的吸附能力越強，即洗脫能力越強。*表17-1一些溶劑在矽膠上的?o值溶劑?溶劑強度（?o）溶劑?溶劑強度（?o）正戊烷0.00甲基特丁基醚0.48正己烷0.00醋酸乙酯0.48氯仿0.26乙腈0.52二氯甲烷0.40異丙醇0.60乙醚0.43甲醇0.70*吸附色譜法洗脫順序ka=KaSa/Vm在色譜柱（Sa與Vm一定）時，Ka大的組分保留強，後被洗脫，Ka小的組分在吸附劑上保留弱，先被洗脫。Ka與組分的性質（極性、取代基的類型和數目、構型有關）。*以矽膠為吸附劑：極性強的組分吸附力強。①飽和碳氫化合物為非極性化合物，不被吸附。②基本母核相同，引入的取代基極性越強，則分子的極性越強，吸附能力越強；極性基團越多，分子極性越強(但要考慮其他因素的影響)。③不飽和化合物的吸附力強，雙鍵數越多，吸附力越強。④分子中取代基的空間排列*三、離子交換色譜法分離原理利用被分離組分離子交換能力的差別而實現分離。分為陽離子交換色譜法和陰離子交換色譜法。陽離子交換：陰離子交換：離子交換通式：交換再生++3RNR+OH-ClRNR+3ClOH交換再生++RSOH+Na+Na++33HRSO*四、空間排阻色譜法分離原理根據被分離組分分子的線團尺寸 進行分離。 也稱為分子排阻色譜法。**空間排阻色譜法

根據空間排阻（stericexclusion）理論，孔內外同等大小的溶質分子處於擴散平衡狀態：滲透係數：Kp=?Xs?/?Xm?（0＜Kp＜1）由溶質分子的線團尺寸和凝膠孔隙的大小所決定。在一定分子線團尺寸範圍內，Kp與分子量相關，即組分按分子量的大小分離。*空間排阻色譜法固定相多孔凝膠：軟質、半軟質和硬質主要性能參數平均孔徑排斥極限（Kp=0）：不能滲透進入凝膠的任何孔隙最低分子量分子量範圍：排斥極限（Kp=0）與全滲透點（Kp=1）之間的分子量範圍圍。選擇凝膠時應使試樣的分子量落入此範圍。*空間排阻色譜法流動相要求：能溶解試樣、潤濕凝膠，粘度要低水溶性試樣選擇水溶液為流動相(稱為凝膠過濾色譜gelfiltrationchromatography；GFC)；非水溶性試樣選擇四氫呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲醯胺等有機溶劑為流動相(凝膠滲透色譜gelpermeationchromatography；GPC)。*空間排阻色譜法保留體積與滲透係數的關係Vm≈V0分子線團尺寸（分子量）大的組分，其滲透係數小，保留體積也小，因而先被洗脫出柱。*小結色譜過程方程式：分配係數大的組分保留時間長（保留體積大），晚流出色譜柱。K在分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜和凝膠色譜中，分別為狹義分配係數K、吸附係數Ka、選擇性係數KA/B和滲透係數Kp，Vs分別為色譜柱（或薄層板）內固定液體積、吸附劑表面積、離子交換劑總交換容量和凝膠孔內總容積。*第四節色譜法基本理論*要使R大，必須： 1、?tR大---?k大----熱力學 2、W小---峰展寬