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超支化聚赖氨酸接枝表面抑菌性能试验方法贴膜法

A.1适用范围

A.1.1本方法适用于具有抑制细菌或真菌作用的超支化聚赖氨酸接枝表面的抑菌效果测定。

A.1.2本方法适用于细菌或真菌直接接触于接枝表面的类型，通过将细菌种植于样品表面，然后用塑

料薄膜覆盖，使细菌与样品表面充分接触，以测定其抑菌效果。

A.1.3本方法不适用于浸提、扩散等可溶出性抑菌接枝表面的抑菌效果测定。

A.2材料和制样

A.2.1试验菌株

大肠埃希菌（ATCC8099）、金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、白色念珠菌（ATCC10231），也可根据

特定用途选用其他菌株。

A.2.2试剂

pH为7.2～7.4的0.03mol/L磷酸盐缓冲溶液（PBS）。

A.2.3培养基

营养琼脂培养基、营养肉汤培养基。

A.2.4试验器材

试验器材如下：

a)高压蒸汽灭菌锅：温度（121±2）℃、压力（103±5）kPa；

b)pH计：精度±0.2；

c)天平：感量±0.01g；

d)移液器：枪头应灭菌；

e)培养箱：控温精度±1℃；

f)漩涡搅拌器；

g)超声波清洗器；

h)带螺盖试管：灭菌；

i)平皿：直径90mm～100mm，应灭菌；

j)加塞锥形瓶或三角瓶；

k)覆盖膜：选用厚度为0.05mm～0.10mm的聚乙烯或聚丙烯材料。

A.2.5试验制样

A.2.5.1试样制备3片，对照样片制备6片，对照样片与试样基底相同，但不含抑菌接枝表面。

A.2.5.2除特别说明外，覆盖膜的尺寸为（40±2）mm×（40±2）mm，试样尺寸为（50±2）mm×（50

±2）mm，对照样片尺寸与试样一致。如果试样尺寸不为（50±2）mm×（50±2）mm，则根据试样的大

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小按比例减小覆盖膜尺寸，但覆盖膜面积应不小于400mm，且覆盖膜边缘距试样边缘2.5mm～5.0mm。

所使用试样和覆盖膜的实际尺寸应在试验报告中说明，对应的接种液体积应按覆盖膜面积变化的比例进

行调整并在试验报告中记录。

A.2.5.3在制样时，注意避免试样被微生物或有机物污染。必要时，可在试验前使用75％酒精擦洗、

紫外灭菌30min或其他不影响接枝表面抑菌性能的方法清洗试样。清洗方法应在试验报告中注明。

A.3试验步骤

A.3.1.1将试验菌株于新鲜斜面培养基培养24h后的培养物用PBS洗下，制成菌悬液。将菌悬液用

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1/500的营养肉汤稀释为2.5×10CFU/mL～1.0×10CFU/mL试验用菌悬液。

A.3.1.2取3个试样，将试样有效抑菌面朝上，放于无菌平皿中，取0.4mL试验用菌悬液滴于样片中

央，倾斜平皿使其均匀扩散于样片表面。薄膜覆盖，小心触压薄膜，使菌液均匀散开，避免菌液溢出薄

膜外。盖上平皿盖。同时取3个对照样片放于无菌平皿中，取0.4mL试验用菌悬液滴于样片中央，倾

斜平皿使其均匀扩散于样片表面。按相同方法用薄膜覆盖，盖上平皿盖，见图A.1。

标引序号说明：

1——覆盖膜；

2——试验用菌悬液；

3——试样；

4——培养皿；

5——培养皿盖。

图A.1试验用菌悬液接种示意图

A.3.1.3试验用菌悬液不应从覆盖膜边缘溢出，可采取以下方法防止试验用菌悬液溢出：

a)减少菌液体积以适应试样表面，但菌液体积应不小于0.1mL。当菌液体积减少时，应增加接

种液细菌的浓度；

b)如果采用a）方法仍发生溢出，可通过增加琼脂或其他惰性增稠剂增加菌液的粘度。

A.3.1.4将3个接种试验用菌悬液的试样平皿和3个对照样片平皿，置于温度（36±1）℃、相对湿度

不低于90％的条件下培养（24±2）h。

A.3.1.5向平皿中加入10mLPBS，用移液枪充分冲洗平皿中的样片和覆盖薄膜，将细菌洗下，必要时

可使用超声振荡洗脱菌液。

A.3.1.6吸取1mL洗下的菌液，宜选取10倍稀释和100倍稀释度接种，每个稀释度接种2个营养琼

脂平皿，置于（36±1）℃、相对湿度不低于