《克隆抗体的制备》课件.pptVIP

*****************课程目标掌握单克隆抗体的制备通过本课程的学习,学生将了解单克隆抗体的特性以及其制备的关键步骤。了解单克隆抗体的临床应用学生将学习单克隆抗体在诊断、治疗等领域的广泛应用,并掌握相关实验方法。展望单克隆抗体技术的发展趋势本课程还将探讨单克隆抗体制备技术的前沿发展,为学生未来的研究提供启示。克隆抗体的概述克隆抗体是指从单一细胞克隆中获得的一种单特异性抗体。与传统的多克隆抗体不同，克隆抗体具有高度的特异性和纯度。它由同一种B淋巴细胞克隆产生,能识别特定的抗原表位。克隆抗体的制备过程包括免疫小鼠、制备杂交瘤细胞、培养和筛选、纯化等步骤。该技术在生物医学研究和诊断领域有广泛应用。单克隆抗体的特性高度纯度单克隆抗体来自单个克隆细胞,具有高度的均一性和特异性。高度特异性单克隆抗体能准确识别单一靶标分子,不会与其他相似分子交叉反应。大量生产单克隆抗体可通过杂交瘤细胞培养大量制备,供应稳定可靠。恒定性能批次间单克隆抗体的性质和功能保持一致,实验结果可重复。单克隆抗体的优势高度特异性单克隆抗体可以精准识别单一抗原表位,避免了多抗原相互干扰,提高了检测灵敏度和准确性。生产稳定性单克隆抗体可以大量稳定生产,为化学诊断试剂和治疗用药的批量供应提供保障。体外重复性好单克隆抗体的性质稳定,可重复性强,有利于建立标准化的检测体系。可修饰设计单克隆抗体可通过工程化技术进行亲和力提升、偶联等二次修饰,扩展其应用范围。单克隆抗体的制备流程免疫小鼠首先需要选择合适的抗原免疫小鼠,诱导小鼠体内产生目标抗体。细胞融合从免疫小鼠中分离出产生目标抗体的浆细胞,与髓细胞进行融合形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养杂交瘤细胞被培养并扩增,持续分泌目标单克隆抗体。抗体表达检测对培养基进行检测,确定杂交瘤细胞是否有效表达目标单克隆抗体。单克隆抗体纯化采用亲和层析等方法从培养基中纯化得到高纯度的单克隆抗体。质量控制通过各种实验手段对纯化的单克隆抗体进行质量检测和控制。免疫小鼠1选择免疫小鼠根据预定的实验目标,选择合适的小鼠品系,如BALB/c或C57BL/6，确保小鼠的免疫系统正常健康。2注射免疫原将纯化的免疫原,如蛋白质、多肽或细胞等,混合佐剂后多次注射小鼠,刺激其产生特异性抗体。3评估免疫效果定期采集小鼠血清,测定抗体滴度,确保免疫效果良好,满足后续细胞融合的需求。细胞融合11.免疫小鼠选择适合的抗原刺激免疫小鼠22.摘取脾脏从免疫小鼠中分离出具有特定抗体的脾淋巴细胞33.细胞融合将脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合,形成杂交瘤细胞44.筛选亚克隆从大量杂交瘤细胞中选择产生目标抗体的亚克隆细胞融合是制备单克隆抗体的关键步骤。通过将免疫小鼠的脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,可以获得能持续分泌特定抗体的杂交瘤细胞。这一过程需要精细的操作,以确保最终获得高质量的单克隆抗体。杂交瘤细胞选择1筛选阳性杂交瘤通过细胞融合实现杂交瘤细胞产生2选择可分泌抗体的杂交瘤对产生抗体的杂交瘤细胞进行篮选3扩大培养阳性杂交瘤放大培养能稳定分泌抗体的杂交瘤在完成细胞融合后,需要通过一系列篮选步骤从众多杂交瘤细胞中筛选出能持续稳定分泌目标单克隆抗体的杂交瘤株。这一过程包括阳性杂交瘤细胞的筛选、抗体分泌能力的检测以及阳性株的培养扩增等。杂交瘤细胞培养1细胞培养将杂交瘤细胞置于温和的培养环境中2培养基配置提供细胞所需的营养物质和生长因子3细胞株扩增通过细胞分裂不断增加细胞数量4细胞收获在产量达到要求时,收集所需的杂交瘤细胞杂交瘤细胞培养是制备单克隆抗体的关键步骤。我们需要为细胞提供合适的温度、pH值、培养基等生长环境,确保细胞活力和分裂能力,最终得到足够数量的目标细胞。抗体表达检测1ELISA检测利用酶标抗体检测目标抗体浓度2WesternBlot分析通过蛋白电泳和免疫印迹分析抗体特异性3流式细胞术检测利用荧光标记抗体检测细胞表面抗原在单克隆抗体制备过程中,对杂交瘤细胞表达的抗体进行检测和分析至关重要。主要方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、WesternBlot分析和流式细胞术检测,可准确测定抗体浓度、特异性和亲和力等指标,确保所制备的单克隆抗体满足应用要求。单克隆抗体纯化亲和层析利用抗原与抗体之间的特异性结合,通过亲和层析柱进行纯化分离。离子交换层析根据蛋白质的电荷特性,利用离子交换层析柱进行纯化。凝胶过滤层析利用蛋白质分子量大小的差异,通过凝胶过滤层析柱进行分离纯化。疏水相互作用层析利用蛋白质的疏水性质,通过疏水相互