《细胞与分子生物学实验》教学课件合集（非AI生成）.pptx

细胞与分子生物学实验;实验课注意事项;课程安排;生物化学四大基本技术;显微镜的使用

细胞形态观察

《细胞培养技术》录像;光学显微镜基本结构;色差矫正

（复消色差）;用右手握住镜臂，左手托镜座--------双手拿

左眼看，右眼看纸绘图---------两眼都要用

物镜选用：低----高----油，必须在卡口上

目镜调节：由最低向上调，先粗后细

聚光镜光度调节，光圈的大小调节

放置玻片标本时,应注意标本的正反，把要观察的部分对准通光孔的正中央。

粗、细调节器都不能做单方向的旋转，如一直下降会压碎玻片标本。

显微镜用后，应转动粗调节器使载物台下降,取下玻片,并转动旋转盘,使物镜离开聚光镜,然后上升载物台使物镜接近镜台；目镜、物镜、反光镜等用擦镜纸擦拭干净。;;;;作图要求;植物细胞有丝分裂：洋葱根尖切片;前期(prophase);中期(metaphase);后期(anaphase);末期(telophase);;;;;;荧光显微镜的使用;24;1;（9）－荧光转盘;明场：

1．打开右下方显微镜透射光电源（1）。

2．设置聚光器（2），若只需要普通的明场观察，将聚光器设置为“BF”。若需进行相差观察，按所选择的物镜放大倍数将聚光器设置为“PH1”(10×、20×)或“PH2”(40×)。

3．将所需观察的标本置于载物台上（3）。

4．选择你要用的物镜（4）(4×、10×、20×、40×)。

5．利用调焦操纵轮（5）聚焦和观察图像。

6．若尚需采集图像，见操作步骤13“图像采集操作”。;荧光：

7．在明场观察之后，若还需进行荧光观察，可关闭显微镜透射光电源或上拨上方“Stop”档片（6），挡住透射光，并同时打开荧光独立电源（7）。

8．打开左侧荧光光栅拉杆（8），使荧光光路打开。

9．转动荧光转盘（9），选择合适的荧光激发滤块(1、2:空白3:A蓝色4:I3绿色5:N2.1红色)。

10．选择你要用的物镜(4×、10×、20×、40×)。

11．利用调焦操纵轮，聚焦和观察图像。

12．若尚需采集图像，见操作“图像采集操作”。;采集图像：（用徕卡LAS(LeicaApplicationSuite)采集图象）

13．打开电脑，启动WindowsXP系统，双击LAS图标。

14．在聚焦清晰的状态下打开右侧活动杆（11），使光路通过CCD至电脑。此时可从电脑屏幕上看到图像。

15．点击“获取”→“摄像头”，调整各项参数(如曝光时间等)。

16．点击“获取图像”，命名文件并将文件保存至硬盘。

17．如果要采集同一个视野下的明场和荧光图像，需保证显微镜透射光电源和荧光独立电源均处于开的状态，通过调节Stop”档片，可在聚焦清晰的状态下先关闭左侧荧光光栅拉杆（8），采集明场的图像，保存。然后上拨“Stop”档片，挡住透射光，拉出左侧荧光光栅拉杆（8），使荧光光路开通，采集荧光图像，保存。;30;?不要频繁开关荧光电源，打开后至少使用半小时才能关闭；关闭后至少半小时才能重新打开(确保汞灯冷却，汞灯寿命约200小时)。

?保持显微镜各部件(如载物台)的整洁，目镜、物镜、聚光镜等光学部件表面有灰尘时，应先用洗耳球吹掉，再用擦镜纸蘸乙醚:乙醇(7:3)混合液由内向外螺旋形轻轻擦拭干净。

?用后关闭显微镜电源、电脑，登记使用情况。

?每次使用后，应待仪器（电源、灯等）冷却，再用防尘罩盖上显微镜和附件。;荧光蛋白转染效率观察;明场观察;荧光下观察;设备与器材

培养液的除菌与无菌试验9’48”

无菌操作12’34”

细胞的原代培养14’32”

细胞的传代培养26’08”

细胞的冻存30’52”

细胞的复苏41’28”;医学细胞生物学;实验安排;细胞融合

——牛蛙红细胞的体外融合;了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。

通过PEG诱导牛蛙血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。

熟悉用血细胞计数板计数细胞。;同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并，称自发融合；异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合，称诱发融合。

细胞融合（cellfusion）又称体细胞杂交（cellhybridization），是指将不同来源的两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞并使之分化再生、形成新物种或新品种的技术。来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂交细胞（hybridcell），此杂交细胞具有很强的生命力，增殖旺盛。

常用方法：生物方法、化学方法、物理方法。;细胞融合的原理;融合过程中两个细胞膜的变化过程;显微镜下的细胞融合过程;;PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子质量的多聚体，具有强烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白质的作用，能够有效地促进植物原