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1.2微生物的培养技术及应用高压蒸汽灭菌液体培养基二微生物的选择培养与计数
课题背景自然界中微生物数量繁多,种类庞杂,要想从中分离出需要的特定微生物并不容易,尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时,更难实现。稀释涂布平板法呈现的杂菌群那么我们又如何达成这一目标呢?科学家们应用选择性培养基解决了这一难题。
阅读课本P17—18,思考下列问题:(2分钟完成)1.实验室中微生物筛选的原理?2.选择培养基的概念?3.选择培养基的类型?4.比较选择培养基与鉴别培养基?5、选择培养基配方的设计???二、微生物的选择培养和计数(一)选择培养基
科学实例:寻找耐高温的DNA聚合酶寻找目的菌种时,要根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物,使耐高温的细菌(DNA聚合酶)保留下来。(一)选择培养基耐高温的酶耐高温生物体高温环境(热泉、火山口)寻找寻找那么,如何从众多的微生物中筛选出单一菌种?生物与环境相适应的观点生物与环境相适应的观点筛选原因:启示:PCR(聚合酶链式反应)是一种在体外DNA复制的技术,此项技术要求使用耐高温(930C)的DNA聚合酶。1973年,科学家在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐高温的水生栖热菌,并分离到耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)。实例:
1.实验室中微生物筛选的原理人为提供_________________的条件(包括_____、_____和_____等),同时___________________________。有利于目的菌生长抑制或阻止其他微生物的生长营养温度pH2.选择培养基的概念在微生物学中,将允许生长,同时或其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。特定种类的微生物抑制阻止3.选择培养基的类型类型条件分离得到的菌种改变培养条件70~80℃的高温添加某种化学物质加入青霉素高浓度食盐特殊碳、氮源石油是唯一碳源营养缺陷不加碳源不加氮源水生栖热菌(淘汰细菌)酵母菌、霉菌等真菌金黄色葡萄球菌石油降解菌自养型微生物固氮菌《金版》P24点拨提升
培养基中加氨苄青霉素具有抗氨苄青霉素能力的菌落不添加抗生素的培养基上的菌落没有氨苄青霉素抗性基因的细菌被淘汰怎样筛选(选择)出抗氨苄青霉素能力的细菌?举例哪些菌被淘汰?
项目选择培养基鉴别培养基原理加入不影响甚至促进目标微生物生长,而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长),使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应用途培养、分离出目标微生物鉴别目标微生物举例培养酵母菌和霉菌时,可在培养基中加入青霉素,抑制细菌的生长;利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有,则菌落呈黑紫色,且带有金属光泽)图示尿素分解菌大肠杆菌拓展延伸4、比较选择培养基与鉴别培养基
思考-讨论5、选择培养基配方的设计尿素的立体结构尿素[CO(NH2)2]含氮量高,化学性质稳定,是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌之所以能分解尿素,是因为能合成脲酶,来催化尿素分解。讨论:1.你如何设计培养基配方,将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来?2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点?使用以尿素作为唯一氮源的选择培养基,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长发育繁殖区别:只是用尿素作为唯一氮源,培养基的其他营养成分基本相同。《金版》P18例1、例2、例4P221
牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000mlKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml培养基一培养基二讨论:1.从物理性质看两种培养基属于哪类?依据是什么?培养基的主要用途是什么?都属于固体培养基。依据是添加了凝固剂琼脂,且比例为1.5%-2%。培养基的主要用途是分离、鉴定、计数。2.从用途上来讲,哪个属于选择培养基?将得到何种细菌?培养基二属于选择培养基;其可获得能分解尿素的微生物。3.两种培养基中共有哪些成分?碳源、氮源、无机盐、水培养基一的碳源为_______,氮源为_______;培养基二的碳源为_______,氮源为_______;牛肉膏蛋白胨葡萄糖尿素(一)选择培养基疑难突破一:选择培养基配方的设计
编号①②③④⑤成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O
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