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广东畜牧兽医科技2021年（第46卷）第3期试验研究·69·
鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白原核表达载体的构建
1111，2*
刘云霞，仇微红，叶贺佳，梁昭平
（1.广州市华南农大生物药品有限公司，广东广州511300；
2.华南农业大学，广东广州510642）
摘要∶本研究旨在构建鸡传染性支气管炎病毒（IBV）原核表达体系，制备其S1目的蛋白，
为建立IBVELISA检测方法奠定基础。以IBVQX型基因为模板，PCR扩增出S1蛋白基因，连
接至pET⁃32a原核表达载体，获得重组质粒pET（32a）⁃S1，将重组质粒转入大肠杆菌BL21感受
态细胞后进行IPTG诱导表达。SDS⁃PAGE分析结果表明，重组S1蛋白在大肠杆菌BL21中获得
表达，分子量约为60kDa。Western⁃blot分析表明，重组蛋白能与Anti⁃His标签抗体发生特异
性反应。利用Kcl染色法，成功纯化S1目的蛋白。本研究成功构建了pET（32a）⁃S1重组原核表
达质粒，并在大肠杆菌中获得表达，为进一步制备S1蛋白抗体奠定了基础。
关键词∶鸡传染性支气管炎病毒；原核表达；S1蛋白；蛋白纯化
中图分类号∶S852.65文献标识码∶A文章编码∶1005⁃8567（2021）03⁃0069⁃05
鸡传染性支气管炎（AvianInfectionBronchitis，（Nucleocapsid，N）、纤突蛋白（Spike，S）、膜蛋白
IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Avianinfections（Membrane，M）和小膜蛋白（Envelope，E）。IBV基
bronchitisvirus，IBV）引起的鸡的一种急性、高度接因组依次为：5′cap⁃Replicase⁃S⁃3a⁃3b⁃3c（E）⁃5a⁃5b⁃
触性传染病。主要引起呼吸系统疾病，如：咳嗽、N⁃poly（A）3′。IBVS蛋白由mRNA2编码，由2~3个
打喷嚏、气管啰音等，临床症状为呼吸困难、肾炎、相同的单体以非共价键连接构成的聚合物，组成
产蛋及蛋品质下降［1，2］。可感染各日龄的鸡，以IBV外层的纤状突起，S蛋白单体包含2个亚基：S1
1～4周龄雏鸡为重。发病率和死亡率极高。IB首和S2。S蛋白的N末端在跨越内质网内膜时，信号
先发现于19世纪40年代，在中国IBV病毒首次分肽被切除。S蛋白前体被裂解成S1、S2两个亚基，
离于1970s，现在已经分离出多种不同基因型的其裂解位点保守结构为RRXRR。S1约为90KD，
IBV，如QX⁃IBV、4/91、KM91、TW等。苗立中等在由520~538个氨基酸组成，S2约84KD，由625个
山东地区获得48株IB分离毒株，遗传进化分析显氨基酸组成。
［6］
示其中46株为QX型，2株为Mass，表明QX型已成目前IB疫苗的研究包括活疫苗、灭活苗、载体
为山东地区IBV流行的优势基因［3］。目前IB已在疫苗和DNA疫苗等。本研究根据QX型S1基因序
世界范围内流行，给养禽造成巨大的经济损失。列，构建原核表达载体，通过SDS⁃PAGE、WB验证
［4⁃6］
IBV为冠状病毒科（Coronaviridae），冠状病毒成功构建重组原核表达质粒，并通过kcl染色法成
属（Coronavirus），单股正链RNA，有囊膜，囊膜上功获取S1纯化蛋白，为IB
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