生化实验室基本操作 .pdfVIP

生化实验室基本操作

1玻璃仪器的清洗

实验中所用的玻璃仪器清洁与否，直接影响实验的结果，往往由於仪器的不

清洁或被污染而造成较大的实验误差，有时甚至会导致实验的失败。做生物化

学实验对玻璃仪器清洁程度的要求，比一般化学实验的要求更高。这是因为：①

生物化学实验中蛋白质、酶、核酸等往往都是以“毫克”和“微克”计的，稍有

杂质，影响就很大。②生物化学实验对许多常见的污染杂质十分敏感，如金属离

子（钙、镁离子等）、去污剂和有机物残基等，因此玻璃仪器（包括离心管等塑

料器皿）是否彻底清洗净就是非常重要的。

⑴初用玻璃仪器的清洗

新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用0.5％的去污剂洗

刷，再用自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液中过夜（不可少于四小时），

再用自来水冲洗，最后用无离子水冲洗两次，在100℃～120℃烘箱内烘干备用。

⑵使用过的玻璃仪器的清洗

先用自来水洗刷至无污物，再用合适的毛刷沾去污剂（粉）洗刷，或浸泡在

0.5％的清洗剂中超声清洗（比色皿决不可超声），然后用自来水彻底洗净去污剂，

用无离子水洗两次，烘干备用（计量仪器不可烘干）。清洗后器皿内外不可挂有

水珠，否则重洗，若重洗后仍挂有水珠，则需用洗液浸泡数小时后（或用去污粉

擦洗），重新清洗。

⑶石英和玻璃比色皿的清洗

决不可用强碱清洗，因为强碱会浸蚀抛光的比色皿。只能用洗液或1％～2％

的去污剂浸泡，然后用自来水冲洗，这时使用一支绸布包裹的小棒或棉花球棒刷

洗，效果会更好，清洗干净的比色皿也应内外壁不挂水珠。

2塑料器皿的清洗

聚乙烯、聚丙烯等制成的塑料器皿，在生物化学实验中已用的越来越多。第

一次使用塑料器皿时，可先用8mol/L尿素（用浓盐酸调pH=1）清洗，接着依

次用无离子水、1mol/LKOH和无离子水清洗，然后用10—3mol/LEDTA除去金

属离子的污染，最后用无离子水彻底清洗，以后每次使用时，可只用0.5％的去

污剂清洗，然后用自来水和无离子水洗净即可。

3洗液的配制

因己确定铬有致癌作用，因此配制和使用洗液时要极为小心，常用两种配制

方法如下：

⑴取100mL工业浓硫酸置于烧杯内，小心加热，然后慢慢加入5g重铬酸

钾粉末，边加边搅拌，待全部溶解并缓慢冷却后，贮存在磨口玻璃塞的细口瓶内。

⑵称取5g重铬酸钾粉末，置于250mL烧杯中，加5mL水使其溶解，然后

慢慢加入100mL浓硫酸，溶液温度将达80℃，待其冷却后贮存于磨口玻璃瓶内。

4其他洗涤液

⑴工业浓盐酸：可洗去水垢或某些无机盐沉淀。

⑵5％草酸溶液：用数滴硫酸酸化，可洗去高锰酸钾的痕迹。

⑶5％～10％磷酸三钠（NaPO·12HO）溶液：可洗涤油污物。

342

⑷30％硝酸溶液：洗涤二氧化碳测定仪及微量滴管。

⑸5％～10％乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na）溶液：加热煮沸可洗脱玻璃

2

仪器内壁的白色沉淀物。

⑹尿素洗涤液：为蛋白质的良好溶剂，适用于洗涤盛过蛋白质制剂及血样

的容器。

⑺有机溶剂：如丙酮、乙醚、乙醇等可用于洗脱油脂、脂溶性染料污痕等，

二甲苯可洗脱油漆的污垢。

⑻氢氧化钾的乙醇溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液：这是两种强碱性

的洗涤液，对玻璃仪器的侵蚀性很强，可清除容器内壁污垢，洗涤时间不宜过长，

使用时应小心慎重。

5玻璃和塑料器皿的干燥：

生化实验中用到的玻璃和塑料器皿经常需要干燥，通常都是用烘箱或烘干机

在110℃～120℃进行干燥，而不要用丙酮荡洗再吹干的方法来干燥，因为那样会

有残留的有机物覆盖在器皿的内表面，从而干扰生物化学反应。硝酸纤维素的塑

料离心管加热时会发生爆炸，所以决不能放在烘箱中干燥，只能用冷风吹干。

6移液

准确的分析方法对于生物化学实验是极为重要的，在各种生物化学分析技术

中，首先要熟练掌握的就是准确的移液技术。为此要用到各种形式的移液管，其

中有一些是学生们在化学实验中未