DB34T 3101-2018 猕猴桃溃疡病菌检疫鉴定方法.pdfVIP

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B16

DB34

安徽省地方标准

DB34/T3101—2018

猕猴桃溃疡病菌检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofPseudomonassyringaepv.actinidae

2018-04-16发布2018-05-16实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T3101—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。

本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、安徽省检验检疫科学技术

研究院、安徽省农业科学院园艺研究所。

本标准主要起草人：杨雪、陈雨、高同春、戚仁德、姚剑、齐永杰、张金云、伊兴凯、张爱芳、谷春

艳、李云飞、臧昊昱。

I

DB34/T3101—2018

猕猴桃溃疡病菌检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了猕猴桃溃疡病菌的检疫鉴定方法。

本标准适用于猕猴桃的苗木、枝叶、花蕾中猕猴桃溃疡病病菌的检疫和鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3猕猴桃溃疡病菌的基本信息

3.1病原菌：丁香假单胞菌猕猴桃致病变种（Pseudomonassyringaepv.actinidae）

3.2分类地位：属细菌界Bacteria，蛋白菌门Proteobacteria，变形菌纲GammaProteobacteria，

假单胞目Pseudomonadales，假单胞科Pseudomonadaceae，假单胞属Pseudomonas。其他信息参见附录

A。

4方法原理

本方法以PCR鉴定和致病性鉴定为主要判定依据，猕猴桃溃疡病菌的形态特征作为辅助鉴定依据。

5仪器设备

5.1高速离心机：转速≤15000r/min

5.2涡旋振荡器

5.3PCR仪

5.4高压灭菌锅

5.5恒温培养箱：20℃~30℃

5.6冰箱：4℃、-20℃、-70℃

5.7恒温水浴锅：4℃~100℃

5.8电泳仪

5.9凝胶成像仪

5.10可调移液器：1-10μL，10μL-100μL，100μL-1000μL

5.11天平：精度0.001g

5.12纯水仪

5.13超净工作台

1

DB34/T3101—2018

6试剂和培养基

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB/T6682中三级水的标准。

6.1PCR试剂：2×PCRTaqMasterMix

6.2凝胶电泳试剂：琼脂糖、TAE电泳缓冲液（参见附录B.1）

6.3培养基：细菌培养基（参见附录B.2）

7实验室鉴定

7.1病原菌分离与纯化

将疑似猕猴桃溃疡病的发病组织用70％乙醇表面消毒后，挑取少许病健交界处的新鲜病组织放到

无菌的培养皿中，加