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微微⽣⽣物物限限度度检检查查概概述述及及⽅⽅法法

微⽣物限度检查概述及⽅法

第⼀部分药品微⽣物限度检查原理；

⼀微⽣物学基本原理

（⼀）、微⽣物的概念和类；

所谓微⽣物（microorgamisms）是⼀群个体微⼩结构简单⾁眼不能直接看到，必须借助显微镜以及其它⼿段才能辨微⼩⽣

物。

1、结构类型

按微⽣物细胞结构和组成不同可分

原核细胞型微⽣物：代表（细菌）真核细胞型微⽣物：代表（真菌）⾮细胞型微⽣物：代表（病毒）

2、营养类型

根据微⽣物的不同营养要求，可分为⾃养型和异养型两类，⼜以所利⽤能源的来源不同，分为化能营养型和光能营养型。

药品中所污染的微⽣物，从营养型⾓度看，他⼤多数异养型，且以腐⽣性和兼性寄⽣性化能异养型为主，容易⽤⼈⼯培养繁

殖，是药品进⾏⽆菌及限度检查的最基本原理。

3、影响微⽣物⽣长繁殖的因素

1）物理因素：温度、湿度、渗逶压、辐射

2）化学因素：营养物质、酸碱度、氧、有毒物质：

其影响微⽣物⽣长的机制主要有

a使菌体蛋⽩变性或沉淀

b⼲扰微⽣物酶系统各的影响其代谢

c损伤微⽣物细胞膜，使内容物逸出。

3）⽣物因素。

在微⽣物之间，微⽣物与寄主动植物之间均存在着各种互相作⽤的关系，主要为寄⽣、共⽣、拮抗关系等。噬菌体与寄主菌、

细菌素对某些细菌的抗菌作⽤，就是⽣物因素的具体表现。四、微⽣物代谢及其在⽣长检定中的意义

微⽣物⽣化鉴定试验，所使⽤的基本原理，就是利⽤微⽣物所物有的代谢反应，其中⼤部分波及到酶的反应

1）微⽣物主要代谢内容

A、呼吸作⽤-根据微⽣物呼吸作⽤最终电⼦受体性质分为呼吸作⽤，⽆氧呼吸作⽤及发酵作⽤三种，⽆本质区，都是物质被

氧化，同时另⼀物质被还原只是物质被氧化分解程度和释放⽔平不同。

相关的⽣化鉴反应

如过氧化氢酶试验，硝酸盐还原试验，氰化钾试验等。

B、糖的分解

有关的⽣化鉴定反应

如糖（醇、苷）类发酵试验，葡萄糖的氧化/发酵试验，甲基试验，甲基红试验，VP试验

C、蛋⽩质和氨基酸的分解

相关⽣化鉴定试验

如吲哚试验、明胶液化试验、硫化氢试验等。

（2）、微⽣物酶

酶是由细胞产⽣的特殊蛋⽩质或特殊蛋⽩质复合物，并能催化各种⽣物化学反应的有机催化剂，与⼀般⽆机催化剂相⽐，酶能

在常温压下进⾏催化，有催化效率⾼和⾼度专⼀性的特点。

有关的⽣化鉴定反应

如糖代谢试验中的B-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）蛋⽩质和氨基酸的代谢中的氨基酸试验等。

⼆、药品中常见⼏种微⽣物的介绍

1、细菌⼀般知识

细菌形态多样，个体较⼩，⼀般的1~10UM

细菌细胞结构：粘液层和夹膜-⾎清学分理

细胞壁-⾰兰⽒染⾊

细胞膜-⽣化鉴（蛋⽩质分解）

细胞质

核质-DNA

附属器官（鞭⽑、菌⽑、芽孢）--识、签定细菌种类重要特征

细菌⽣长变化过程：1、诱导期2、对数⽣长期3、稳定期4、死亡期

细菌的群体形态：1、菌落2、菌苔3、液体培养物质形态

细菌在液体培养基内的⽣长现象，基本上分为混浊、菌膜、沉淀三种。以药品中检验的细菌为例，⼤肠埃希⽒杆菌、沙门菌、

志贺菌均为混浊⽣长；铜绿假单胞菌为专性需氧菌，在培养基表⾯可形成菌膜，膜下混浊，越往下菌越少；⾦黄⾊葡萄球菌也

为均匀混浊⽣长，但有部分细菌可沉淀于管认底。

细菌菌种的鉴定⽅法：1、菌种纯化2、鉴定的基本⾁容

2、霉菌的⼀般知识

1、霉菌属于直菌，⽰指专营腐⽣或寄⽣⽣活的⼀群微⼩的丝状真菌，属真菌的⼀部分⼤多数霉菌属于⽆⼦实体的丝状真菌，

具分枝的菌丝交织或菌丝体。⼀部分菌丝可产⽣孢⼦进⾏繁殖产⽣⼦孙，⼀部分则吸取营养称营养菌丝。霉菌菌落不是群体，

⼀般为个体，由⼀个孢⼦萌发，⽣长⽽形成的菌丝⽀织⽽成为菌丝体

2、药品常见的霉菌属1）根霉属2）⽑霉属3）犁头霉属4）基他

3、酵母菌⼀般知识

1、酵母菌多数为单细胞，⼀般呈卯圆形、圆形或圆柱形，常有芽体相连为真核细胞、有完整的细胞结构，具细胞壁、细胞

膜、细胞质、细胞核及细胞器

2、常见的酵母菌属有1、酵母菌属，⼀般在液体培养时不产⽣菌酵，在长期培养后有的能⽣成菌酵2、裂殖酵母菌层，但薄⽽

光滑，发酵产物主要为⼄醇⼆氧化碳

3、基它（汉逊⽒酵母属，德巴利⽒酵母属等）

4、在玫瑰红钠琼脂平板上的形态特征；多为圆形微凸，边缘整齐，表⾯光滑显润，内层⽣长为圆形，铁饼形，纺锤形或三⾓

形，有酒⾹味，它与霉菌极易区，但若出现粘质如油⾹味，它与霉菌极易区，但若出现粘质如油状细菌菌落时，两者较难

区，最可靠鉴⽅法是显微镜检查，酵母菌个体⽐细菌⼤，绝⼤多数为出芽繁殖。

第⼆部微⽣物限度检查法

1989年下发药品卫⽣标准补充规定和说明。中国药典19