人教版高中生物学选择性必修3生物技术与工程精品课件 第3章 基因工程 第2节 第1课时 获取目的基因与构建基因表达载体.pptVIP

第2节基因工程的基本操作程序第1课时获取目的基因与构建基因表达载体第三章内容索引基础落实?必备知识全过关重难探究?能力素养全提升课程标准1.运用系统思想解释基因工程的基本步骤和原理。2.基于细胞内DNA复制的原理,阐明PCR的原理,说出PCR所需的条件及其反应过程。3.结合模式图说出基因表达载体的组成,并理解构建目的。基础落实?必备知识全过关知识点一目的基因的筛选与获取1.培育转基因抗虫棉的四个步骤目的基因的__________→____________________的构建→将目的基因导入__________→目的基因的__________。?2.筛选合适的目的基因(1)从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选。(2)应用测序技术、序列数据库、序列比对工具等认知更多的基因结构和功能,以便找到合适的目的基因。筛选与获取基因表达载体受体细胞检测与鉴定3.利用PCR获取和扩增目的基因(1)PCR的目的:在体外对目的基因的核酸序列进行大量复制。(2)PCR原理:____________________。?(3)PCR条件:一定的缓冲溶液、__________、分别与两条模板链结合的2种引物、4种脱氧核苷酸和____________________酶。?分别与两条模板链结合,使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸聚合酶链式反应DNA半保留复制DNA模板耐高温的DNA聚合(4)每次循环的过程:变性→复性→延伸。①变性:当温度超过90℃时,____________________。?②复性:冷却至__________℃左右时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。?③延伸:加热至72℃左右时,4种脱氧核苷酸在耐高温的____________的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。?(5)特点:上一轮循环的产物作为下一轮反应的__________,每一次循环后,目的基因的量可以__________,即成指数形式扩增(约为2n,n为扩增循环的次数)。?(6)鉴定:常用____________________来鉴定PCR的产物。?打开DNA双链双链DNA解聚为单链50DNA聚合酶模板增加一倍琼脂糖凝胶电泳旁栏边角想一想用PCR技术可以扩增mRNA吗?结论语句辨一辨1.PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应。()2.用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列。()3.PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶。()4.PCR过程中需要模板DNA和一个引物分子。()提示mRNA不可以直接扩增,需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。×√××知识点二基因表达载体的构建1.基因表达载体的构建目的使目的基因在受体细胞中__________,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够__________和__________。?2.基因表达载体的组成稳定存在表达发挥作用启动子上游RNA聚合酶转录终止子下游转录标记目的基因3.基因表达载体的构建过程(1)首先用一定的__________切割载体。?(2)然后用__________限制酶或能产生__________的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。?(3)再利用__________将目的基因片段拼接到载体的切口处。?旁栏边角想一想将生物的所有DNA直接导入受体细胞不是更简便吗?如果这么做,效果会怎样?限制酶同种相同末端DNA连接酶提示采用总DNA注射法进行遗传转化,即将一个生物的总DNA提取出来,不进行基因表达载体的构建,通过注射等方法导入受体植物。这种方法针对性差,无法确定哪些基因导入了受体植物。结论语句辨一辨1.表达载体的复制和目的基因的表达均启动于复制原点。()2.外源DNA必须位于重组质粒的启动子上游或终止子的下游才能进行表达。()3.基因表达载体中需要含有起始密码、终止密码、目的基因、标记基因。()4.借助抗生素抗性基因可将含目的基因的受体细胞筛选出来。()×××√重难探究?能力素养全提升主题一目的基因的筛选与获取【情境探究】在基因工程中,目的基因是用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。目的基因主要是指编码蛋白质的基因。请结合教材“目的基因的筛选与获取”相关内容,回答下列问题。1.获取目的基因的方法有哪些?提示人工合成目的基因;用PCR特异性地快速扩增目的基因;通过构建基因文库来获取目的基因。2.现在常用PCR技术特异性地快