肝糖原的提取及鉴定.ppt

电泳分类：自由电泳、区带电泳（按支持物不同分，按装置不同分，按pH的连续性不同分）电泳分类：自由电泳、区带电泳（按支持物不同分，按装置不同分，按pH的连续性不同分）肝糖原的提取及鉴定实验目的了解肝糖原的性质并掌握其提取方法。熟悉肝糖原的鉴定方法。实验原理（一）肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎。加入三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中。糖原不溶于乙醇，故用乙醇可将糖原沉淀。（二）肝糖原的鉴定糖原的基本结构糖原与碘作用呈红色。糖原水解产物与本尼迪克特试剂在沸水浴下生成砖红色沉淀。（一）肝糖原的提取1.取新鲜动物肝脏(一只动物肝分为4份）至研钵中，加入3mL10%的三氯醋酸溶液，充分研磨至糜状（戴手套操作），再加入3mL10%的三氯醋酸和3mL蒸馏水继续研磨片刻，使成均匀糜浆（均分为3组）。2.取3ml转入离心管中，2000r/min离心5min。3.取上清液于另一离心管中，加入等体积的95%乙醇，混匀后静置片刻，使糖原呈絮状析出，再2500r/min离心10min。弃去上清液，将离心管倒置于滤纸上。操作步骤（二）肝糖原鉴定肝糖原沉淀中加入1mL蒸馏水，用细玻棒搅拌至溶解，得糖原溶液。1.取小试管2支，一支加入糖原溶液500μl，另一支加入蒸馏水500μl，然后两管再各加入碘液2滴，混匀。观察管中颜色变化，并解释现象。2.在剩余糖原溶液内加浓盐酸3滴，沸水浴中加热10min，取出冷却，加入20%的NaOH溶液1ml至碱性。加入班氏试剂1mL，再置沸水浴中加热2-3min取出。观察管中沉淀的生成，并解释现象。

新鲜肝脏须迅速以三氯醋酸处理。?肝脏研磨应充分。?离心时，离心管平衡后对称放入离心机。注意事项电泳分类：自由电泳、区带电泳（按支持物不同分，按装置不同分，按pH的连续性不同分）电泳分类：自由电泳、区带电泳（按支持物不同分，按装置不同分，按pH的连续性不同分）