微生物学第四章-酶的分离纯化公开课课件.pptVIP

第四章酶的分离纯化;第四章酶的分离纯化及产品成型;一、生物下游加工技术;二、分离纯化的一般流程;发酵液;;发酵液;第一节酶的提取分离（酶溶液的制备）;发酵液;二、细胞破碎—只对胞内酶;利用机械力的搅拌，剪切或研碎细胞。

组织捣碎机，细胞研磨器，匀浆器等。;高压匀浆器;珠磨机;通过温度，压力，声波等各种物理因素的作用，将组织细胞破碎的方法。

冻融法、压差法、超声波法。;通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎的方法。

有机溶剂：如甲苯，丙酮，丁醇，氯仿等。

非离子型表面活性剂：吐温、催通等。;微生物种类;机械破碎;三、酶的提取;（一）提取方法;（二）提取过程中的注意事项;第二节酶的沉淀分离、离心和膜过滤技术;（一）盐析沉淀法;1、盐析操作;（2）调整盐浓度的方法;加固体（NH4）2SO4：;①加入饱和硫酸铵溶液;2、为了得到较好的盐析效果，应控制下列因素：;（二）有机溶剂沉淀法;（三）等电点沉淀;（四）选择性变性沉淀法;第二节酶的沉淀分离、离心和膜过滤技术;第二次作业：;二、膜过滤技术在酶分离纯化中的应用;借助于一定孔径的半透膜，将不同大小、不同形状和不同特性的物质颗粒或分子进行分离的技术。;膜分离技术的地位和影响;（一）膜分离的类型;2、按膜孔径或截留物质的大小：;灰尘;;各种膜分离法的原理和应用范围;1、微滤(MF);2、超滤(UF);纳滤膜主要用于截留粒径在2～10nm，分子量

为1000左右的物质，可以使盐和小分子物质透过，

操作压（0.5～1MPa）。;4、反渗透(RO);5、电渗析;

;1、若除去酶溶液中的盐分，可采用下面哪种分离方式？（）

A.板框过滤B.微滤C.超滤D.反渗透

2、若除去酶溶液中的生物小分子，可采用下面哪种分离方式？（）

A.板框过滤B、微滤C.超滤D.反渗透

3、在采用微生物发酵生产壳聚糖酶时，若采用膜过滤的方法除去发酵液中的菌体细胞，可采用哪种膜分离方式？

用生产所得的壳聚糖酶来降解壳聚糖生产壳寡糖时，反应完成后，可采用哪种膜分离方法除去反应液中的壳聚糖酶？;三、膜分离技术的基本流程;中空纤维超???器

中空纤维膜分离装置是将成束的中空纤维装入一筒内，两端封闭。

每根中空纤维内腔直径为0.2mm。;中空纤维超滤膜组件;清洗液;

;主要有：陶瓷、微孔玻璃、不锈钢和碳素等。

适用：微滤膜。

特点：是机械强度高，耐高温、耐化学试剂和耐有机溶剂，但缺点是不易加工，造价较高。;（1）透水率（透水通量、流率）：

是指在一定温度和压力条件下单位膜面积在单位时间内透过的水量。

处理蛋白质（酶）溶液时，透水率常为纯水的10%。