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免疫荧光检查;

1.方法

根据抗原-抗体反应的不同，免疫荧光检查有以下3种。;

（1）直接法：用以检查病人皮肤组织中有无免疫球蛋白或补体的沉积。用特异荧光抗体直接滴加于待检标本上，由荧光素标记的抗体与抗原发生特异结合，使之呈现荧光，根据荧光分布和形态确定抗原部位和性质。此法简单、特异，能用已知抗体检查未知抗原，但一种标记抗体只能查一种抗原。直接法采用病人的病变组织，冷冻切片（4μm厚）后，做荧光染色。;

（2）间接法：用以检测病人血清中是否存在某种特异抗体或自身抗体。反应中有两对抗原抗体相继起结合反应，第一抗体与抗原是相对应的特异结合，而第二对抗体（即荧光抗体）则是针对第一抗体的结合体。由于第一抗体原分子常可与若干抗体分子结合，因此经两次结合反应后，灵敏度大大提高。本法常用于各种自身抗体的检测。间接法须取病人静脉血。;

（3）补体结合法：本法是在间接法的基础上发展而成的，即在抗原抗体反应时加入补体，再用荧光标记的抗补体抗体进行示踪。检测妊娠疱疹病人的自身抗体时，须采用此法。;

2.临床应用;

（1）微生物学方面：多种细菌、病毒及立克次体病原的快速诊断；血清中抗微生物的抗体的检测。;

（2）病理组织学方面：均采用直接法。①基底膜荧光：红斑狼疮显示颗粒状或块状崎岖不平的荧光染色，以IgG及补体C3为主。疱疹样皮炎于真皮乳头体内有颗粒状IgA沉积。类天疱疮、妊娠疱疹及获得性大疱性表皮松解症，显示线状IgG及补体C3沉积。线状IgA大疱病有基底膜带线状IgA沉积。②细胞间荧光于天疱疮可见表皮细胞间IgG沉积。③血管壁荧光于多种脉管炎可显示管壁或管周荧光染色。;

（3）自身抗体测定：采用间接法，对结缔组织病，尤其是系统性红斑狼疮的诊断有很大意义，对大疱性皮肤病也有较大意义。以抗核抗体为例，实验室的观察内容介绍如下：①定性。先以低倍镜观察，再转高倍镜证实，见到亮绿色荧光且与底核形态一致者为阳性。②定量定滴度。将阳性标本做一系列倍比稀释，见到明确阳性荧光的最后一个稀释度为该病人血清的滴度。③定形??。用高倍镜甚至油镜观察，常见的荧光样式有：均质状——核染均匀一致，反映抗去氧核糖核蛋白或DNA（去氧核糖核酸）抗体，可见于各种结缔组织病。周边状——胞核周围有较中央明显的荧光带，反映抗DNA抗体，主要见于SLE（系统性红斑狼疮）。斑点状——核体内有许多小的荧光点，均匀分布，反映可溶性核蛋白抗体，主要见于硬皮病，也可见于SLE。斑点状线状——核体内除点荧光外，还有呈线网状荧光，主要见于SLE。

除了抗核抗体外，用间接免疫荧光法还可检测dsDNA（双链去氧核酸）抗体等。;

3.注意事项

（1）每次试验应该有阳性对照和阴性对照。

（2）应注意荧光抗体的质量，如荧光素与蛋白的比例（F∶P），一般以2左右为宜。抗体的含量决定合适的稀释度。

（3）标本应及时检查，并应避光保存，不然荧光会猝死。;

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