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毕赤酵母转化方法
实验概要
本实验介绍了毕赤酵母电转化方法。该方法无需产生去壁细胞，是产生毕赤酵母重组子的简便方法。与去壁细胞效率相似。
实验步骤
1.细胞准备：
1)在含5mlYPD的50ml离心管中，培养毕赤酵母，30度过夜。
2)取0.1-0.5ml过夜培养物，接种含500ml新鲜培养基的2L摇瓶，过夜生长至OD600＝1.3-1.5。
3)在4度，1500g离心5min收集细胞，用500ml预冷的灭菌水悬浮细胞。
4)如上离心，用250ml预冷的灭菌水悬浮细胞。
5)如上离心，用20ml预冷的1M山梨醇悬浮细胞。
6)如上离心，用1ml预冷的1M山梨醇悬浮细胞，至终体积约1.5ml。
注意：可冻存80ul等量的电感受态细胞，但转化效率会下降很多。
2.转化：
1)取80ul上述细胞与5-20ug线性化DNA(溶于5-10ulTE)混合，转入预冷的0.2cm电转杯中。
2)在冰上放置5min。
3)根据所使用装置推荐的酿酒酵母参数进行电击。
4)立即加入1ml预冷的1M山梨醇至杯中，将内容物转移至灭菌离心管中。
5)分成200-600ul等份，涂于MD或RDB平板上。
6)在30度孵育平板至克隆产生，筛选Mut/Muts表型。
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