微生物实验培训课件.ppt

检化员微生物培训各类菌种保藏条件及时间

菌种培养基保存温度传种时间细菌一般多用于营养琼脂或根据菌种规定选用培养基4~6℃芽孢杆菌3~6个月，其它细菌每个月酵母菌一般用麦芽汁琼脂或麦芽汁酵母膏琼脂4~6℃一般4~6个月丝状真菌一般用PDA琼脂、蔡氏琼脂或麦芽汁琼脂等4~6℃每4个月移植一次（每2个月移植一次）检化员微生物培训

菌种保管

?菌种保管应有专人负责，保存与加锁的冰箱中或特制的白铁箱中加锁置阴暗处，确保菌种安全。因工作变动时，必须做好交接工作。?菌种应有详细登记本，包括名称、分离日期、鉴定日期、鉴定者、主要鉴定性能，并注意记录使用、转移及销毁情况和原因。?各种菌种应按规定时间定期移种。一般每移种3次后作一次全面鉴定。注意菌种有无污染和变异，如发现污染和变异时，应及时更换。?购置菌种，应有介绍信。全部保存菌种应具备清单，并定期向部门负责人报告。检化员微生物培训FTM的灵敏度检查培养基标准菌种(10-100cfu/ml)30～35℃培养培养天数12345FTM(12ml)金黄色葡萄球菌管1管2緑脓杆菌管3管4枯草芽孢杆菌管5管6生胞梭菌管7管8空白对照管9检化员微生物培训培养基质量控制：灵敏度检查接种金黄色葡萄球菌、緑脓杆菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30～35℃培养18～24h；用0.9%无菌氯化钠溶液制成10-100cfu/ml菌液备用。接种生胞梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐液体培养基中，30～35℃培养18～24h；用0.9%无菌氯化钠溶液制成10-100cfu/ml菌液备用。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，23～28℃培养24～48h；用0.9%无菌氯化钠溶液制成10-100cfu/ml菌液备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，23～28℃培养5～7d,加3～5ml0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成10-100cfu/ml孢子悬液备用。检化员微生物培训菌种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉；制备成活菌数＜100cfu的菌悬液备用菌株传代次数不得超过5代培养基接种每种菌接种至2管相应的培养基，另取一支不接种作空白对照，按规定温度时间培养。结果判断空白对照管应无菌生长，每种菌接种后的2管培养基管均生长良好，该培养基的灵敏度检查符合规定。培养条件金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌接种至营养肉汤（或营养琼脂培养基）30～35℃培养18～24小时；生孢梭菌接种至硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养3天；白色念珠菌、黑曲霉接种至改良马丁培养基中23～28℃培养5天培养基质量控制：灵敏度检查检化员微生物培训培养基质量控制：无菌检查每批灭菌的培养基随机取不少于5支(瓶)，培养14天，应无菌生长。检化员微生物培训实验三：无菌实验检化员微生物培训无菌实验预防假阳性措施1在一个专门准备、环境控制的房间内的层流罩的环境中进行测试2在整个测试过程中使用无菌技术3用避免污染的方法把测试器皿、培养基和测试物品引入测试区4测试产品表面的细菌污染，在引导测试物品进入测试区之前，先对产品的外包装进行消毒。5对测试中使用的设备、材料和产品进行灭菌6简化进行测试必须的操作7尽量避免悬浮微粒的产生8环境时时监测（沉降菌检测）检化员微生物培训无菌实验相关标准GBT19973.2-2005-医用器材的灭菌微生物学方法第二部分：确认灭菌过程的无菌试验ISO11737-22009-医用器材的灭菌微生物学方法第二部分：确认灭菌过程的无菌试验检化员微生物培训无菌实验：培养条件不论哪种无菌试验方法：FTM32.5±2.5℃，不少于14天；SCDB22.5±2.5℃，不少于14天；改良马丁23-28℃，不少于14天。如果14以内观察到阳性结果，不必继续培养。检化员微生物培训无菌实验阳性对照应根据供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品．以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗霉菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。加菌量小于l00cfu，供试品用量同供试品无菌实验时每份培养基接种的样品量。阳性对照管培