SC∕T 7224-2017 鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增（rt-lamp）检测方法.docxVIP

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B41

中华人民共和国水产行业标准

SC/T7224-2017

鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法

Detectionmethodbyreversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplificationforspringviraemiaofcarpvirus

2017-06-12发布2017-10-01实施

中华人民共和国农业部发布

I

SC/T7224—2017

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由农业部渔业渔政管理局提出。

本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。

本标准起草单位：全国水产技术推广总站、深圳市检验检疫科学研究院、深圳出入境检验检疫局、暨南大学食品安全与研究院。

本标准主要起草人：郑晓聪、贾鹏、李清、王津津、余卫忠、何俊强、于力、刘莹、兰文升、史秀杰、刘荭、秦智锋、石磊。

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SC/T7224—2017

鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法

1范围

本标准给出了鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测的技术原理，规定了试剂和材料、器材和设备、操作步骤及结果判断。

本标准适用于鲤春病毒血症病毒的初筛检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T15805.5鱼类检疫方法第5部分：鲤春病毒血症病毒(SVCV)GB/T18088出入境动物检疫采样

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

AMV酶：AMV逆转录酶(avianmyelobastosisvirusreversetranscriptase)Bst酶：BstDNA聚合酶(大片段)[BstDNAPolymerase(largefragment)]DEPC:焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate)

dNTP:脱氧核苷三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphate)EDTA:乙二胺四乙酸(ethlenediaminetetraaceticacid)

PBS:磷酸盐缓冲溶液(phosphatebuffersaline)

RT-LAMP:逆转录环介导等温扩增(reversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplifica-

tion)

SVCV:鲤春病毒血症病毒(springviraemiaofcarpvirus)

4技术原理

本标准根据SVCV(参见附录A中A.1)基质蛋白基因，设计了4条引物(参见附录B)特异性识别基因组中的6个区域。在AMV酶和链置换Bst酶的作用下，63℃恒温扩增60min,即可实现SVCV核酸扩增。而后，在扩增反应后加入显色液，即可通过观察颜色变化判定结果。

5试剂和材料

5.1水：符合GB/T6682中一级水的规格。

5.2DEPC水：配制方法见附录C中C.1或购买商品化试剂。

5.3磷酸盐缓冲液(PBS):配制方法见C.2或购买商品化试剂。

5.4Trizol试剂：商品化试剂，4℃保存。

5.5三氯甲烷：分析纯，避光常温保存。

5.6异丙醇：分析纯，使用前预冷至-20℃。

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SC/T7224—2017

5.7引物：

SVCV-FIP:5-CGCTTGTTCCTAGAACCTTTGTAATTTTTCCCTTGAAGACGATGTCAG-3,40μmol/L备用；

SVCV-BIP:5-TACAGATTGATCATGTTCCGTTGTGTTTTTGGAATACAAGGCCGACC-3,40μmol/L备用；

SVCV-F3:5-GGATATACAATTGGACACC-3,10μmol/L备用；

SVCV-B3:5-ACAACTTCCTTGCACCTT-3,10