真菌酸性核酸酶检测试剂、制备方法及真菌酸性核酸酶的检测方法.pdf

真菌酸性核酸酶检测试剂、制备方法及真菌酸性核酸酶的检

测方法

专利名称：真菌酸性核酸酶检测试剂、制备方法及真菌酸性

核酸酶的检测方法

技术领域：

本发明涉及真菌酸性核酸酶检测试剂、制备方法及真菌酸性

核酸酶的检测方法。

背景技术：

核酸酶(nucleases)是指所有可以水解核酸的酶。不同来源

的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只

能作用于RNA，称为核糖核酸酶(RNase)，有些核酸酶只能

作用于DNA，称为脱氧核糖核酸酶(DNase)，有些核酸酶专一

性较低，既能作用于RNA也能作用于DNA，因此统称为核酸

酶(nuclease)。根据核酸酶作用的位置不同，又可将核酸酶

分为核酸外切酶(exonuclease)和核酸内切酶

(endonuclease)。根据核酸酶的最适作用PH，可将核酸酶分

为碱性核酸酶和酸性核酸酶，细菌的核酸酶多为碱性核酸酶

(如金黄色葡萄球菌核酸酶)，而真菌的核酸酶多为酸性核酸

酶(如桔青霉的核酸酶)。测定核酸酶的活力一般采用紫外比

色法(张树政.酶制剂工业.科学出版社.1998,749-750.)，该

方法比较繁琐，所需试剂较多，但可以对核酸酶活性进行较

准确的定量测定。该方法不能对核酸酶进行快速定性检测。

采用核酸电泳条带的弥散，虽然可以部分表观核酸分子的降

解程度(沈鹤柏，夏静芬，吴庆锋，余沛涛，章宗穰.Ce离

子对寡聚脱氧核苷酸的断裂作用.上海师范大学学报(自然

科学版)，2000，3:67-72)，但不能用于检测核酸酶。郭良

洽(郭良洽，叶芳贵，林旭聪，谢增鸿.甲苯胺蓝荧光猝灭法

测定核酸.光谱学与光谱分析，2006，Noll121124；Kui

Jiao,Qing-JunLi,WeiSun,Zeng-JianWang.

VoltammetricDetectionoftheDNAInteractionwith

ToluidineBlue.Electroanalysis.2005,11:9971002)

等以甲苯胺蓝为荧光探针，基于DNA对甲苯胺蓝的荧光猝灭

作用，建立了一种定量测定DNA的新方法。在pH8.5的

Tris-HCl缓冲溶液中，测定小牛胸腺DNA的线性范围为0.

1-610ug/mL，检测限为27ng/mL。对于细菌产生的碱性核

酸酶，Steritfeld等(Streitfeld，MM.，HoffmannEM,and

JanklowHM.Evaluationofextracellular

deoxyribonucleaseactivityinPseudomonas.J.

Bacteriol.1962.847780)最早采用甲苯胺兰0检测细菌

对DNA的水解作用，产生有色沉淀圈来进行判别酶活性的有

无。Smith等(Smith，PB，HancockGA,andRhodenDL.

Improvedmediumfor

detectingdeoxyribonuclease-producingbacteria.Apple.

Microbiol.1969，18991993)将甲基绿(methylgreen,MG)

用于检测细菌对DNA的水解作用。目前甲苯胺兰-DNA琼脂培

养基已被用于金黄色葡萄球菌碱性核酸酶的检测(TNase试

验)中(UnitedStatesPatent4481291；孟昭赫.食品卫生检

验方法注解微生物学部分(第一部分)[M].北京人民卫生出

版社，1990.)，用于检验样品中是否存在金黄色葡萄球菌，

但对核酸酶活力没有定量分析。真菌的核酸酶是酸性酶，故

上述培养基不能直接用于真菌核酸酶的检验测定。由上述文

献资料可见，采用可用于真菌酸性核酸酶快速检测、以及定

量测定的方法尚未见有报道。

发明内容

本发明首先所要解决的技术问题是提供一种真菌酸性核酸

酶检测试剂，为此