第二章提取分离鉴定的方法和技术4.docx

商洛职业技术学院教案

课程名称授课教师

天然药物化学

顾晓燕 授课类型

专业班级 06药学

讲授 学 时 2

章节题目 第二节天然药物化学成分分离、精制、鉴定的方法与技术（三）

1、掌握离子交换色谱、大孔吸附色谱、凝胶色谱、高效液相色

谱的分离原理、技术及应用

目的 2、熟悉渗透法、升华法及分馏法的分离原理及应用

与要求

重点与难点方法

与手段

使用教材及参考书

重点：操作技术难点：原理

讲授＋实验

《天然药物化学》主编：吴剑锋人民卫生出版社

《天然药物化学学习指导》主编：吴剑锋人民卫生出版社

教 案 续 页

教 学 内 容

第二节天然药物化学成分分离、精制、鉴定的方法与技术（三）

（三）离子交换色谱法

具有酸性、碱性、两性基团的化合物在水中多呈解离状态，据此可用离

子交换法进行分离。

1、原理：离子交换原理

2、离子交换树脂的选择

根据交换基团不同分为：

①阳离子交换树脂

强酸性（—SO3-H+）弱减性（—COO-H+）

②阴离子交换树脂

强碱性[—N+（CH3）3Cl]

弱减性（—NH2及仲胺、叔胺基）

3、操作方式

固定相：离子交换树脂

流动相：水或含水溶剂洗脱液：强酸性阳离子交换树脂（H型）——稀氨水洗脱

强碱性阴离子交换树脂（OH型）——稀氢氧化钠洗脱操作步骤：

①树脂的预处理

②装柱

③上样

④洗脱

⑤再生

应用：①用于不同电荷离子的分离，如水提取物中的酸性、碱性、两性化合物的分离。②用于相同电荷离子的分离，如同为生物碱，但碱性强弱不同，

辅助手段时间分配

仍可用离子交换树脂分离。

（四）大孔吸附树脂法

通常分为极性和非极性两类。

1、基本原理：吸附性和分子筛性相结合。吸附性是由范德华引力或氢键引

起的。分子筛是由于其本身多孔性结构产生的。

2、影响分离因素：

①一般非极性化合物在水中易被非极性树脂吸附，极性化合物在水中易被极性树脂吸附。糖是极性水溶性化合物，与D型非极性树脂吸附作用很弱。

②物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附力就小，反之就大。

③溶剂的影响

3、操作方式

①树脂的预处理

②装柱和上样

③洗脱

洗脱液的选择：洗脱液可使用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。最常用的是乙醇—水

④树脂柱的清洗

⑤树脂的再生

4、应用：广泛应用于化合物的分离与富集工作中。如：苷类与糖类的分离，生物碱的精制，多糖、黄酮、三萜类化合物的分离等。

（五）凝胶过滤法：

1、基本原理：分子筛原理。即利用凝胶的三维网状结构的分子筛的过滤作用

将化合物按分子量大小不同进行分离。

2、凝胶的种类与性质：种类很多，常用的有以下两种：

①葡聚糖凝胶（Sephadex-G）：只适用于水中应用，且不同规格适合分离不同分子量的物质。

②葡聚糖凝胶LH－20（SephadexLH-20）：为SephadexG-25经羟丙基化后得到的产物，具有以下两个特点：具有分子筛特性，可按分子量大小分离物质；在由极性与非极性溶剂组成的混合溶剂中常常起到反相分配色谱的作

用，适合于不同类型有机物的分离。

3、操作方式

①装柱

②加样

③洗脱

④再生

（六）高效液相色谱

也称高压液相色谱、高速液相色谱法，实在经典液相色谱的基础上发展起来的一种高效、快速、高灵敏的色谱分离法。由于采用了高效填充剂，并配以高压输液泵、高灵敏检测器、自动记录装置及制动收集装置，使高效液相色谱法的分离速度及效率均大大提高，更趋于仪器化、自动化。

1、分类

快速柱色谱（约2.02acute;105Pa），

Lobar低压柱色谱（5.05acute;105Pa），中压柱色谱（5.05~20.2acute;105Pa），

一般分析用HPLC，制备用HPLC（20.2acute;105Pa）。

固定相：RP—2、RP—8或RP—18流动相：水—甲醇或水—乙腈

洗脱顺序：化合物极性越大，越先出柱；反之，化合物极性越小，越后出柱。

2、应用：通常用于分离水溶性或极性较大的成分，如苷类、酚性化合物等。根据物质分子大小进行分离

六、膜过滤法：

概念：膜过滤法是一种用天然或人工合成的膜，以外界能量或化学位差为推动力，对双组分或多组分的溶质和溶剂进行分离、分级、提纯或富集的方法。分类：膜过滤技术主要包括渗透、反渗透、超滤、电渗析、液膜技术等。

透析法：是膜过滤法中的一种。

原理：透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜、而大分子物质不能透过半透膜的性质，以达到分离的目的，本质上是一种分子筛作用。

应用：对于生物大分子，一般可以通过透析法进行浓缩和精制。如药用

酶的精制。分离和纯化皂苷、蛋白质、多肽、多糖等大分子物质，可将其留在半透膜内，而将如无机盐、单糖、双糖等小分子的物质透过半透膜，进入膜外的溶液中，而加以分离精制。

七、升华法

根