(正式版)B-T 40135-2021 葡萄细菌性疫病菌检疫鉴定方法.docxVIP

ICSCCS

65.020.01

B16

中华人民共和国国家标准

GB/T40135—2021

葡萄细菌性疫病菌检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofXylophilusampelinus(Panagopoulos)

Willemsetal.

2021-05-21发布

2021-12-01实施

国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

发布

I

GB/T40135—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。

本文件主要起草单位：长沙海关技术中心、中国检验检疫科学研究院、济南海关技术中心。

本文件主要起草人：周慧平、莫瑾、袁小雅、黄迎波、张红梅、王哲、朱金国、粟智平、彭梓、严…。

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GB/T40135—2021

葡萄细菌性疫病菌检疫鉴定方法

1范围

本文件规定了葡萄细菌性疫病菌的分离培养、免疫学及分子生物学等检测鉴定方法。

本文件适用于葡萄及其繁殖材料中葡萄细菌性疫病菌的检疫和鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于

本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4葡萄细菌性疫病菌分类信息

中文名：葡萄细菌性疫病菌、葡萄嗜木质菌

学名：Xylophilusampelinus(Panagopoulos)Willemsetal.,1987

异名：XanthomonasampelinaPanagopoulos,1969

英文名：cankerofgrapevine,bacterialblightofgrapevine

分类地位：细菌(Bacteria),真细菌(Eubacteria),变形菌门(Proteobacteria),变形菌纲(Betapro-

teobacteria),伯克霍尔德氏菌目(Burkholderiales),丛毛单胞菌科(Comamonadaceae),嗜木质菌属

(Xylophilus)

其他信息见附录A。

5方法原理

根据葡萄细菌性疫病菌与抗体之间特异性反应，对待测物进行免疫学检测；根据葡萄细菌性疫病菌的特异性DNA序列进行分子生物学检测；根据葡萄细菌性疫病菌的培养性状、生物学特性以及危害症

状等对病原菌进行分离培养，必要时进行致病性检测。

6试剂、材料和培养基

6.1试剂和材料

除有说明外，所有试验用试剂均为分析纯或生化试剂。

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GB/T40135—2021

试剂：75%酒精、葡萄糖、琼脂糖、无菌双蒸水、十二烷基硫酸钠(SDS)、三氯甲烷、异戊醇、苯酚、异

丙醇、无水乙醇、蛋白酶K、核酸染料、DNA分子质量标准物、50×TAE电泳缓冲液。

试剂及其配制的信息见附录B。

材料：植物基因组提取试剂盒、细菌基因组提取试剂盒、普通PCR反应试剂盒、荧光PCR反应试剂

盒等。

6.2培养基

YPGA培养基、营养琼脂培养基(NA),培养基及其制备的信息见附录C。分离培养基推荐用YPGA,

也可用NA代替。

7仪器和用具

7.1仪器

生物显微镜(放大倍数400倍以上)、恒温培养箱、电子天平(千分之一)、植物光照培养箱、冰箱、离

心机、酶标仪、电泳仪、PCR扩增仪、实时荧光定量PCR仪等。

7.2用具

可调移液器(2.5μL,10μL,20μL,100μL,1000μL)、吸头、离心管等。

8检疫鉴定方法

8.1现场取样

参照附录A中的症状描述观察藤茎(图A.1)和叶片(图A.2)是否有葡萄细菌性疫病菌的典型症

状。对现场发现上述类似症状的植株进行取样。果实和植株取样方法按照SN/T2122。

8.2样品处理

实验室用水应满足GB/T6682要求。根据后续试验的需求可选择无菌水或不同的抽提缓冲液并

做适当的稀释。

8.2.1有症状植物材料

样品中包括多个植物组织或多个样品，应选择具有典型症状的植物组织分别分离病原菌。幼苗和

藤茎、叶片的分离如下：

a)幼苗和藤