高效液相色谱法(HPLC).ppt

色谱法定义;目录;一、液相色谱分析法的发展;类比液柱色谱法和跑道赛跑;其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。

外标法适用于工厂中的常规分析。

离子色谱法是由离子交换色谱法派生出来的一种分离方法。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。

溶剂分子小，故在最后出峰。

而ＨＰＬＣ改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。

小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；

可对相对分子质量在103-105范围内的化合物按质量分离

八、分离数据的处理方法

必要时，再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成为标示量的百分含量，或根据稀释倍数和取样量折算成百分含量。

王美丽、陈海婷等建立了利用HPLC检测肉制食品中5种邻苯二甲酸酯类增塑剂(PAEs)含量的方法。

按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。

亲和力大，保留时间长；

（一）高效液相色谱分析的流程

内标法是将一定重量的纯物质作为内标物，加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物和待测组分的峰面积（或峰高）及相对校正因子，按公式即可求出被测组分在样品中的百分含量：;高效液相色谱法的突出特点：

1）高压（150－350*105Pa）

2）高速

3）高效

4）高灵敏度（高灵敏度的检测器：紫外10-9g，荧光10-11g）

;三、液相色谱仪（1）;三、液相色谱仪（2）;四、液相色谱分析法的原理;四、液相色谱分析法的原理;;操作过程图示;四、液相色谱分析法的原理;五、高效液相色谱法的主要类型及原理;1、液-液分配色谱

;2、液-固吸附色谱

;举例：

苯乙胺类药物中重酒石酸去甲肾上腺素注射液的高效液相色谱测定法。

色谱条件与系统适应性试验：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.14%更烷基磺酸???溶液——甲醇(65:35)，用磷酸调节PH值至3.0作为流动相；流速为每分钟1ml；检测波长为280nm。理论板数按重酒石酸去甲肾上腺素峰值计算应不低于3000。

;反相高效液相色谱法;举例：巴比妥类药物

苯巴比妥、苯妥英和卡马西平均为临床上常用的抗癫痫药，其药物浓度与疗效和毒副反应密切相关。临床上常将三种药物同时使用，为提高疗效，减少毒副作用与个体差异，为超剂量中毒诊断、治疗与及时调整给药方案提供科学依据，临床上要进行血药浓度检测，而高效液相色谱法是最常用的方法之一。;乙腈(jīng)又名甲基氰，分子式CH3CN，无色透明液体，密度小于水，约为0.79，能与水、乙醇等有机溶剂以任意比混溶，易燃，有毒性。;3、离子交换色谱

;4、离子对色谱

;举例：维生素类药物的分析

维生素具有脂溶性和水溶性两大类，由于其化学结构和性质相差较大，在含水介质中，又要受到光、空气、温度和pH的影响，使测定结果不理想。因而，提出用甲醇和水都能溶解的樟脑磺酸，作为离子对试剂，以二巯基丙烷磺酸钠0.125g/ml作为抗氧化剂，能使被测样品处于稳定的初始状态，结果更为可靠。

;反相离子对色谱

是分离有机离子的有效方法，离子对试剂和其他添加剂的选用规则：1.样品中含有—COOH,—SO3H基团时，选用的离子对试剂应是带正电荷的有机铵盐，以增加样品阴离子在反响色偶中的保留值，选用的流动相一般是甲醇/水；2.除了加入离子对试剂，还要加入磷酸盐或者其他缓冲液，以控制流动相的酸度；3.样品中含有—NH2和—NH基团或其他阳离子时，选用的离子对试剂应是烷基磺酸盐或硫酸盐；4.样品同时含有—NH2，—COOH,—SO3H等不同性质的基团时则以上规则选用的离子对试剂和添加剂都合理。;举例：芳酸及其酯类药物分析

合成氨基水杨酸钠时，以间氨基酚为原料的生产路线较为普遍，因此在成品中可能含有未完全反应的间氨基酚。USP(24)采用离子对高效液相色谱法检测间氨基酚的限量。

色谱条件：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶(C18,10um)；色谱柱为250mmX46mm；流动相为磷酸二氢钠液(0.05mol/L)—磷酸氢二钠液(0.05mol/L)—甲醇(含氢氧化四丁基铵1.9g)(425:425:100)；检测波长为254nm；流速为1.5ml/min。

;5、离子色谱

;阳离子交换：R—H+Na+OH-＝R—Na+H2O