高效液相色谱法.ppt

体积排除色谱的分离机理2固定相是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体，其中含有大量液体（一般是水），柔软而富于弹性。凝胶3流动相不采用改变流动相组成的方法控制分离度凝胶色谱概述分离基于分子在溶液中的体积大小洗脱次序：大分子先被洗脱流动相不参与分离，只起溶剂作用分离效率低色谱行为容易预测Kad值越大，保留时间越长。可表式为：吸附色谱的分离机理随着样品在固定相上的吸附能力由大到小在色谱柱上的保留由长到短硅胶表面结构硅胶表面结构经热处理发生的变化缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾。极性吸附剂上有机化合物的保留顺序如下：氟碳化合物饱和烃烯烃芳烃有机卤化物醚硝基化合物腈叔胺酯醛酮醇伯胺酰胺羧酸磺酸3流动相(洗脱剂)越大，表明流动相溶剂分子对吸附剂的亲和能力越强，则越易从吸附剂上将被吸附的溶质洗脱下来。溶剂分子在单位吸附剂表面上的吸附自由能溶剂强度参数各种不同极性的一元或多元溶剂。硅胶固定相分离苯，甲苯，乙苯，丙苯，丁苯流动相：干燥正庚烷1份水饱和的正庚烷2份干燥正庚烷水饱和的正庚烷改变流动相的组成可改变分离的选择性4应用?具有不同官能团的化合物?具有相同官能团，但数量不同的化合物?异构体例：几种取代位置不同的硝基苯胺的分离。在硅胶吸附剂上的滞留顺序：邻位间位对位邻硝基苯胺间硝基苯胺对硝基苯胺适合分离的物质吸附色谱概述分离基于样品的极性差异。洗脱次序∶一般为正相，即：极性低的先被洗脱常用的流动相∶非极性有机溶剂，如己烷常用固定相∶硅胶、氧化铝。二分配色谱法1.分离原理K不仅与固定相的种类有关，也与流动相的种类有关固定相与流动相均为液体（互不相溶）；分配色谱的分离机理固定相极性流动相极性正相分配色谱组分极性越大，保留时间越长反相分配色谱固定相极性流动相极性组分极性越小，保留时间越长2.流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相.即：当流动相的极性大于固定液的极性时：固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。如C-18柱（反相柱）。（详见后面）分配色谱概述反相色谱的主要类型，基于分子的极性分离洗脱次序：一般为反相，即极性高的先被洗脱常用的流动相：有机溶剂如甲醇、乙腈，水应用添加剂，成为离子对、离子抑制方法常用固定相：碳十八、碳八、胺基等基团反相色谱固定相多为键合相1固定相阳离子：－SO3H(强)－CO2H(弱)阴离子：－N+R3(强)－NH2(弱)基质合成树脂纤维素硅胶离子交换剂阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；三离子交换色谱法2流动相水相缓冲液+有机改性剂调节选择性的主要参数盐种类及浓度pH值阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；各种阴离子在阴离子交换剂上的滞留次序：*用柠檬酸离子洗脱比用氟离子洗脱快阳离子交换树脂阳离子交换阴离子交换3.分离原理阴离子交换4应用离子及可离解的化合物如：氨基酸、核酸、蛋白质等离子交换树脂的分离机理离子交换色谱概述适用于离子型化合物的分离分离基于离子的带电特性洗脱次序受多种因素的影响填料（离子交换树脂）的种类∶阴/阳，强/弱，交换基团样品分子特性盐的种类、浓度温度及pH值有机溶剂四、离子色谱

（ionchromatography）离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一中技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。图片二、离子色谱仪器淋洗液泵色谱柱检测器泵液分离检测记录F-NO3-SO42-Cl-NO2-Br-HPO42-进样阀抑制器检测池进样离子色谱基本原理离子色谱中发生的基本过程就是离子交换，因此，离子色谱本质上就是离子交换色谱。在离子色谱的基本组成中，重要的和与其他高效液相色谱不同的就是抑制器和电导检测器。抑制器的作用废液BackGround：Na2CO3/NaHCO3 (700μS)NaF,NaCl,NaNO3Na2HPO4,Na2SO4～～RetentiontimeConducti