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干细胞模型用于糖原贮积症基因组编辑

糖原贮积症简介

干细胞基因组编辑技术概况

干细胞模型构建策略

基因组编辑具体操作方法

评估基因组编辑效率和脱靶效应

筛选功能性校正干细胞

验证干细胞分化能力

治疗潜力评估ContentsPage目录页

干细胞基因组编辑技术概况干细胞模型用于糖原贮积症基因组编辑

干细胞基因组编辑技术概况主题名称：CRISPR-Cas9系统1.CRISPR-Cas9是一种强大的基因组编辑工具，由导向RNA和Cas9核酸酶组成。2.导向RNA引导Cas9到特定基因座，Cas9随后切割DNA双链，从而产生DNA双链断裂。3.细胞的DNA修复机制利用修复断裂的模板修复DNA，从而引入编辑。主题名称：TALENs1.TALENs（转录激活因子样效应物核酸酶）是一种另一种基因组编辑工具，由定制DNA结合域和核酸酶域组成。2.DNA结合域识别并与目标基因序列结合，核酸酶域切割DNA。3.TALENs的靶向特异性低于CRISPR-Cas9，但它们在某些情况下更易于设计和构建。

干细胞基因组编辑技术概况主题名称：RNA干扰（RNAi）1.RNAi是一种调节基因表达的技术，利用小干扰RNA（siRNA）或微小RNA（miRNA）诱导基因沉默。2.siRNA或miRNA与靶mRNA结合，形成复合物并激活核酸酶，降解目标mRNA。3.RNAi是研究基因功能和靶向治疗的有效工具，但其效力可能较低，并且可能产生脱靶效应。主题名称：碱基编辑技术1.碱基编辑技术是CRISPR-Cas9的衍生技术，使用不切割DNA的修饰Cas9变体。2.修饰Cas9与导向RNA结合并识别目标基因，然后使用连接的脱氨酶或胞嘧啶碱基编辑器对碱基进行修饰。3.碱基编辑技术允许产生点突变或碱基替换，而无需引入DNA双链断裂。

干细胞基因组编辑技术概况主题名称：同源定向修复（HDR）1.HDR是DNA修复的一种机制，当引入外源DNA模板时，可以进行精确的基因校正。2.在CRISPR-Cas9介导的基因组编辑中，引入供体DNA模板可以引导HDR修复，从而插入、删除或修改目标基因。3.HDR可以实现精确的基因组修改，但其效率往往较低。主题名称：非整合病毒递送1.非整合病毒递送系统将编辑元件（例如CRISPR-Cas9或TALENs）递送至靶细胞，而不会将外源DNA整合到宿主基因组中。2.常用的非整合病毒载体包括腺相关病毒（AAV）、慢病毒和质粒DNA。

基因组编辑具体操作方法干细胞模型用于糖原贮积症基因组编辑

基因组编辑具体操作方法CRISPR-Cas系统1.CRISPR-Cas系统是一种源自细菌的基因编辑工具，通过guideRNA（gRNA）引导Cas（CRISPR相关蛋白）对特定DNA序列进行剪切，从而实现基因组编辑。2.gRNA是由Cas9（Cas蛋白的一种）靶向特定DNA序列的20个核苷酸序列组成。3.CRISPR-Cas系统具有高效率、特异性和易于使用等优点，使其成为基因组编辑领域的革命性技术。碱基编辑技术1.碱基编辑技术是一种非切割的基因组编辑技术，通过引入特定酶（如碱基编辑器）诱导DNA上的碱基转换，从而实现基因修复或突变引入。2.碱基编辑技术具有避免脱靶效应的优点，且可精确编辑单碱基对，为纠正错义突变和制造特定突变提供了新的途径。3.目前常用的碱基编辑技术包括胞苷碱基编辑器（CBE）和腺嘌呤碱基编辑器（ABE），它们具有不同的编辑窗口和效率，可满足不同的基因组编辑需求。

基因组编辑具体操作方法质粒载体构建1.质粒载体是用于将外源DNA（如CRISPR-Cas元件或碱基编辑器）导入细胞的环状DNA分子，通常包含启动子、选择标记和复制原点等元件。2.质粒载体的构建需要首先设计和合成gRNA或碱基编辑酶的编码序列，然后将其克隆到质粒载体合适的位置。3.质粒载体构建技术包括酶切连接、金门组装和Gibson组装等方法，需要掌握分子生物学基本操作技能和载体设计原则。细胞转染技术1.细胞转染是指将外源物质（如质粒载体、RNA或蛋白质）导入细胞的过程，是基因组编辑操作的关键步骤。2.常用的转染技术包括脂质体转染、电穿孔转染和病毒载体转染等，每种方法具有不同的效率、特异性和适用范围。3.转染技术的优化对于提高基因组编辑效率至关重要，需要根据细胞类型、基因大小和编辑目的选择合适的转染方法。

基因组编辑具体操作方法基因组编辑验证技术1.基因组编辑验证是基因组编辑操作的关键步骤，用于评估编辑的准确性、效率和脱靶效应。2.常用的基因组编辑验证技术包括T7内切酶检测、Sanger测序和高通量测序等方法，每种方法具有不同的检测灵敏度和成本。3.准确的基因组编辑验证可以确保基因组编辑的成功