兔子骨髓取材.docx

第一次是1周前，把兔子（2.57kg）关在兔笼里，左侧卧位，剪刀尽量把毛剪掉，PVP消毒整个腰部臀部，助手抓住双脚，穿刺点取脊柱右边骨性突出部位（髂后棘），利多卡因局部麻醉至骨膜，左手拇指食指拎起皮肤，右手先将12号穿刺针穿过皮肤，再在左手触摸下找骨性突出部位，垂直脊柱穿刺，开始有接触骨面的粗糙感，后来穿刺过程中突破感强烈，穿刺针固定牢靠，用预先肝素湿润的20ml针筒一次即顺利抽出5ml骨髓，呈深暗红色，较稠，与外周血比较明显不同。带到实验室经ficoll离心取单核细胞层接种培养后

有细胞贴壁生长。

第二次就是今天，同一只兔子，采用乌拉坦1g/kg，耳缘静脉注射全身麻醉，麻醉效果很差，穿刺过程中兔子挣扎剧烈，增加0.5g后仍需要助手抓住双脚。然后悲剧的事情发生了，先是穿刺右坐骨结节，操作步骤同1周前，每次穿入有突破感后，用预先肝素湿润的10ml针筒抽吸，只能抽出0.1ml左右深暗红色液体，在髂后脊上下穿刺5、6次后只抽出1ml骨髓。浑身都在冒汗，于是决定根据文献记录，从股骨大转子沿股骨方向穿刺取骨髓。仍然用左手食指中指摸到骨性标志，拎起局部皮肤先将穿刺针刺入皮下，再摸到穿刺点，沿股骨方向穿刺，有突破感后接针筒反复抽吸有时是干抽，最终抽出2ml左右骨髓。继续冒汗，随即出现了文献中没有记载的方法，将兔子俯卧位，在助手帮助下用剪刀在左髂后棘部位皮肤上作1cm切口，逐层剪开组织直至暴露白乎乎的髂后棘，定位明确后用骨穿针穿刺，顺利抽出2ml骨髓后兔子突然纵声“嗷嗷”大叫，我和助手对视5秒钟，本来还想研究下穿刺的问题，只好决定今天停止这惨绝人寰的暴行，将切口缝合肌注40WU青霉素后带着寒碜的5ml骨髓撤退。

我分析今天穿刺不顺利的因素如下：

1、穿刺针有突破感，但并未真正在骨髓腔内，可能太用力穿到对面骨质中去，应该慢慢退针多次试抽，也

可能方向完全不对没有进入骨髓腔，应改变方向再次穿刺；

2、要么局麻，要么全麻+局麻，反正乌拉坦效果不佳，或者药物过期了（已经放了1个月了），也可以重新配点来再试试。

我心中的疑惑如下：

1、我的穿刺方法到底对不对？

2、第一次穿刺髂骨即轻松取出5ml骨髓是否正常？

3、一般髂骨里骨髓最多能抽出多少？

4、一般穿刺股骨取骨髓是像我那样弄的吗？文献里说穿刺股骨取出1-2ml骨髓，但是如果我使劲抽最多能

抽出多少？

5、有没有取兔子骨髓的高手指导一下？给我一份详细一点的指南，最好有图谱，万分感谢！

一、实验动物的处死

实验动物的处死方法很多，应根据动物实验目的、实验动物品种（品系）、以及需要采集标本的部位等因素，选择不同的处死方法。无论采用哪一种方法，都应遵循安乐死的原则。安乐死是指在不影响动物实验结果的前提下，使实验动物短时间无痛苦地死亡。处死实验动物时应注意，首先要保证实验人员的安全；其次要确认实验动物已经死亡，通过对呼吸、心跳、瞳孔、神经反射等指征的观察，对死亡作出综合判断；再者要注意环保，避免污染环境，还要妥善处理好尸体。

1、颈椎脱臼处死法

此法是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为大、小鼠最常用的处死方法。操作时实验人员用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，实验动物立即死亡。

2、断头处死法

此法适用于鼠类等较小的实验动物。操作时，实验人员用左手按住实验动物的背部，拇指夹住实验动物右腋窝，食指和中指夹住左前肢，右手用剪刀在鼠颈部垂直将鼠头剪断，使实验动物因脑脊髓断离且大量出血死亡。

3、击打头盖骨处死法

主要用于豚鼠和兔的处死。操作时抓住实验动物尾部并提起，用木锤等硬物猛烈打击实验动物头部，使大脑中枢遭到破坏，实验动物痉挛并死亡。

4、放血处死法

此法适用于各种实验动物。具体做法是将实验动物的股动脉、颈动脉、腹主动脉剪断或剪破、刺穿实验动物的心脏放血，导致急性大出血、休克、死亡。

犬、猴等大动物应在轻度麻醉状态下，在股三角做横切口，将股动脉、股静脉全部暴露并切断，让血液流出。操作时用自来水不断冲洗切口及血液，既可保持血液畅流无阻，又可保持操作台清洁，使实验动物急性大出血死亡。

5、空气栓塞处死法

处死兔、猫、犬常用此法。向实验动物静脉内注入一定量的空气，形成肺动脉或冠状动脉空气栓塞，或导致心腔内充满气泡，心脏收缩时气泡变小，心脏舒张时气泡变大，从而影响

回心血液量和心输出量，引起循环障碍、休克、死亡。空气栓塞处死法注入的空气量，猫和兔为20~50ml，犬为90~160ml。

6、过量麻醉处死法

此法多用于处死豚鼠和家兔。快速过量注射非挥发性麻醉药（投药量为深麻醉时的30倍）