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杂酶测定方法之NAD(P)H氧化酶
华元山水
NAD(P)H氧化酶
原理：
NAD(P)H+H?+H?O
GPT
NAD(P)++H?O?
340nm下测定NADH的消耗速率。
单位定义：
下述条件下，每分钟氧化1μmolNADH所需要的酶量为1U。
方法：
试剂
A.磷酸钾缓冲液
B.NAD(P)H溶液
C.酶稀释液
:0.1M磷酸钾缓冲液(pH7.0)
:1.5mM
[10.7mgNADH-Na?(MW=709.4)溶于10ml纯水中；12.5
mgNADPH-Na?(MW=833.4)溶于10ml纯水中。现用现配]
10mM磷酸钾缓冲液(pH7.0)
步骤
1.准备下述工作液于试管中，25℃保温5分钟。(根据测试样本量，等比例调整)2.60mlA液
0.30mlB液
2.取580μl工作液于比色杯中，加20μl样本混匀。
3.340nm下监测30S-180S的吸光度变化速率。
4.以纯水做空白。
计算
1.GOT体积活力(U/mI)=△OD/min×4.82xdf
2.GOT杂酶含量=GOT体积活力/样本酶体积活力=?×10*X%
注意事项
1.样本通常为酶干粉且NAD(P)H氧化酶杂酶含量极低，因此以10mg/ml溶液为起点测定。
△OD/min很低时，应增大酶浓度至50mg/ml测定；
2.磷酸盐缓冲液易长菌，当出现水空白高的情况时，应现配制。
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