SN∕T 1135.11-2013 马铃薯皮斑病菌检疫鉴定方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T1135.11-2013

马铃薯皮斑病菌检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofPolyscytalumpustulans(M.N.OwenetWalccf.)

M.B.Ellis

2013-11-06发布

2014-06-01实施

中华人民共和国发布

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…,国家质量监督检验检查豆总局

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SN/T1135.11一2013

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前

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本部分J;/C！！但GB/T1.1-2009给IJHlJ.J;Ut1J起草．

本部分由国家认iiE认可监督管础委员会lJ;lHiJf：归口．

本部分起草单位2中国俭验位疫科学研究院．

本部分起草人：矣品珊、杜洪忠、严i!.I:、张秋娥．

I

SNIT门35.11-2013

马铃薯皮斑病菌检疫鉴定方法

1范围

3

4.1仪器

4.2用具

烧杯，三角瓶，盘筒，试管，培养阻，酒精灯，银子，剪刀．解剖刀，接种针，载放片，施放片，绕科研样，

移液糕，移液稽l吸头，离心智，液氮锻．

5试剂和培养基

5.1试lrll

古自萄糖，玉在脂粉，液氮，Tri伊HCl.MgCl,.HCI.EDTA,NaOHr、JaOJ\C,KCI,T时，CTAB,TAE，无

水乙iI:i=Ethanoll,SYBRGreenI核酸染料，竟在彷（Chloroform），异芮眩（Jsopropa11oll，异I戈露享Osoamyl

alcohol)，蛋白JlliK,T叫DNA聚合自尊，dNTP，通用引物ITSS和ITS4，实时荧光PCR特异性可i物

PpustFl、PpustR2及银针PpustPr1.

SN/T1135.门一2013

5.2t击养塞

马非非密制销豁置在IJ旨J击养基（PDAl.具体If~占参.w.附录A.

6实验室检疫

6.1症状检查

观察马铃郭块茎l，是否具有浊棕色的病斑以没紫黑色且’而微凸i隘的病斑．挑选具类似病斑的马铃

替块~进行分离及保海峰养．病在1症状倒参见附录A,

6.2分离培养

l且疑似症状病艇的病能交界处组织．用70%乙醉表丽消－~lmin.灭运1水冲洗3{!\.就于PDAI击养

基平H且中.20℃精芥．培养3cl~5d后开始观察.1f发现白色就灰白色菌游.f~接到l.tfr的PDAt营养基

平皿上．培养5d后开始观察病菌的商落精养性状．同n.t在，\1微镜下观察记录分钱也乎、产抱当fl胞的形

状、λ；小等．

6.3保；~培养

将疑｛以症状的鸟铃串串块萃，假密闭坦l斜鑫中IS℃～20℃寓温度下』齿养5d，若淌斑处长血病峭的

子实体戒凶古董体．用援手l’￥t·桃子实体或商丝i4直後制片，授、呢微镜下观察.j己放分生J包寸