2-标准草案--布鲁氏菌荧光偏振抗体检测方法（征求意见稿）.docVIP

DB62/TXXXX-XXXX

ICS65.020.30

B41

DB62

甘肃省地方标准

DB62/TXXXX-XXXX

布鲁氏菌荧光偏振抗体检测方法

FluorescencepolarizationantibodytestforBrucellaabortus

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

甘肃省质量技术监督局???发布

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前??言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。

本标准由甘肃省动物卫生标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：甘肃省动物疫病预防控制中心、中国动物疫病预防控制中心、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、中联瑞（北京）生物科技有限责任公司。

本标准主要起草人：曹丽萍、孙雨、郑红飞、蒋卉、王睿男、孙航、葛忠源，杨琪、朱小青、陈莉丽，庄园。

本文件为首次发布。

各单位或个人在执行本文件过程中如发现需要修改和补充之处，请随时将意见和建议反馈至《布鲁氏菌荧光偏振抗体检测方法》编制组（地址：兰州市城关区红柳滩路41号附1，邮政编码：730046，联系人：曹丽萍，E-mail:906391550@,联系方式：0931-4592016），以供今后修订时参考。

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布鲁氏菌荧光偏振抗体检测方法

范围

本文件描述了应用荧光偏振技术检测光滑型布鲁氏菌抗体的方法。

本文件适用于荧光偏振方法检测动物血清中的光滑型布鲁氏菌抗体，可以用于布鲁氏菌疫苗免疫后动态监测抗体消长变化，也适用于未注射布鲁氏菌疫苗动物的布病检疫及评估养殖场布鲁氏菌疫苗免疫状况。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单元）适用于本文件。

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

《兽医实验室生物安全技术管理规范》

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1布鲁氏菌病brucellosis

布鲁氏菌病（Brucellosis）简称布病，是由布鲁氏菌感染引起的包括人在内的多种哺乳动物共患的传染病。主要感染羊、牛、猪、犬、鹿、骆驼及人等，以流产、早产、死胎、睾丸炎、附睾炎、发热多汗、乏力、关节肿痛、肝脾及淋巴结肿大等为主要特征，

3.2荧光偏振试验fluorescencePolarisationAssay，FPA

荧光分子被偏振光激发后而产生偏振荧光，在溶液温度和粘度一定的条件下，荧光偏振强度主要取决于荧光标记物的体积。激发出的荧光偏振强度与荧光标记物转动速度成反比，小分子物质在溶液中旋转速度快，荧光偏振值较小；大分子物质在溶液中旋转速度较慢，荧光偏振值较大。通过偏振仪检测荧光标记物激发的荧光偏振强度变化，而分析荧光标记物是否与其他物质特异性结合。荧光偏振技术不生成放射性物质，并且能达到亚纳摩尔级的检测限，体现了精准、安全的技术优势。

4试剂

4.1异硫氰酸荧光素（FITC）标记OPS抗原，见附录A。

4.2阴性对照，见附录B。

4.3阳性对照，见附录C。

4.4样品稀释液，见附录D。

5设备与耗材

5.1荧光偏振仪。

5.2单道微量移液器（20μL～200μL；100μL～1000μL；1-5mL）。

5.3黑色避光反应板

6样本采集及处理

牛羊等布鲁氏菌病易感动物静脉无菌采血，不少于2mL/头（只）。室温静置于斜面2h，待血液自然凝固后；或置2℃～8℃冰箱中放置不少于2h，4000r/min离心10min。分离血清，血清应清亮，无溶血，用移液器小心吸出上层血清,操作应符合NY/T541的规定。

7样本存放与运送

血清样本若在一周内检测，可置2℃～8℃条件下保存。若超过一周检测，应置于-20℃以下冷冻保存。运输时注意冷藏，确保样品有效。采集的血清样本可用冰袋或保温箱加冰密封等方式运输，运输时间应尽量缩短。按照《兽医实验室生物安全技术管理规范》进行样品的生物安全标识。样本存放和运输应满足NY/T541的要求。

8试验操作

8.1荧光偏振仪开机准备

打开荧光偏振仪，按照仪器操作规程做好仪器设置和自动加样器的调试，并准备好样品稀释液和荧光标记抗原。