ELISA原理、方法、操作及注意事项.pptxVIP

ELISA原理、方法、操作及注意事项汇报人：AA2024-01-18

ELISA基本原理ELISA常用方法ELISA操作步骤ELISA注意事项ELISA应用实例contents目录

01ELISA基本原理

抗原是能够引起免疫反应的物质，而抗体是由免疫系统产生的针对特定抗原的蛋白质。抗原与抗体当抗原进入机体后，免疫系统会产生一系列的应答反应，包括抗体的产生和细胞免疫应答。免疫应答免疫学基础

抗原抗体反应特异性结合抗原与抗体的结合具有高度的特异性，即一种抗体只能与相应的抗原结合。结合力抗原与抗体之间的结合力非常强，这种结合力是免疫反应的基础。

ELISA技术原理在ELISA技术中，当酶标抗体与固相载体上的抗原结合后，会加入底物进行显色反应。底物在酶的催化下会产生颜色变化，从而实现对抗原或抗体的定量或定性检测。显色反应在ELISA技术中，抗体被标记上酶，形成酶标抗体。当酶标抗体与固相载体上的抗原结合后，酶会催化底物产生颜色反应。酶标记抗体固相载体是ELISA技术中的关键部分，它能够将抗原或抗体固定在载体上，以便于后续的免疫反应和检测。固相载体

02ELISA常用方法

原理将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的抗体，与抗原特异性结合，形成抗原-抗体复合物，通过洗涤去除未结合的酶标抗体，最后加入底物显色。优点操作简便，特异性高。缺点灵敏度相对较低，需要较高浓度的抗原和抗体。直接法

原理先将抗原固定在固相载体上，加入特异性抗体与之结合，再加入酶标记的二抗与抗体结合，形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，通过洗涤去除未结合的酶标二抗，最后加入底物显色。优点灵敏度较高，可检测低浓度的抗原。缺点操作步骤相对较多，可能存在非特异性结合。间接法

竞争法优点可用于小分子半抗原的定量检测。原理将抗原和酶标抗原同时与固相抗体竞争结合，当标本中抗原量增加时，酶标抗原与固相抗体的结合量减少，通过底物显色后颜色的深浅与标本中抗原的含量呈负相关。缺点需要制备酶标抗原，成本较高。

010203原理采用双抗体夹心法，先将特异性抗体固定在固相载体上，加入待测抗原与之结合，再加入酶标记的特异性抗体与抗原的另一位点结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过洗涤去除未结合的酶标抗体，最后加入底物显色。优点灵敏度高，特异性强。缺点需要制备两种特异性抗体，成本较高。夹心法

03ELISA操作步骤

根据实验需求收集不同来源的样品，如血清、血浆、细胞培养上清等。对收集到的样品进行适当处理，如离心去除杂质、稀释等，以保证后续实验的准确性。样品准备与处理样品处理样品收集

按照实验要求准备所需试剂，如包被液、封闭液、洗涤液、底物液等。试剂准备将处理后的样品和对照品加入已包被好的酶标板孔中，每孔加入量要准确且一致。加样试剂配制与加样

根据实验要求设置反应温度，一般为37℃左右。温度控制严格控制每步反应的时间，确保实验结果的准确性。时间控制反应条件设置

结果观察在反应结束后，观察酶标板孔内颜色的变化，判断实验结果。结果记录详细记录每个样品的吸光度值或OD值，并根据实验要求进行数据分析。结果观察与记录

04ELISA注意事项

实验室环境与设备要求保持实验室清洁、干燥，避免灰尘和污染。温度控制在20-25℃，相对湿度在40%-60%之间。实验室环境使用高质量的酶标仪、洗板机、恒温箱等设备，确保准确性和稳定性。定期对设备进行校准和维护。设备要求

VS选择高质量的试剂，确保批间差异小、稳定性好。注意试剂的保质期和生产批次。试剂保存按照试剂说明书的要求进行保存，避免反复冻融和过期使用。一般应存放在2-8℃的冰箱中，避免光照和高温。试剂选择试剂选择与保存

熟悉实验步骤和注意事项，准备好所需试剂和设备。提前预热酶标仪和恒温箱。操作前准备准确加样，避免气泡和溅出。严格控制孵育时间和温度，确保反应的充分进行。加样与孵育使用洗板机进行洗板，确保洗涤充分、干净。按照说明书要求进行显色反应，注意显色时间和温度的控制。洗板与显色在规定时间内终止反应，避免过度显色。使用酶标仪进行读数，确保结果的准确性和可重复性。终止反应与读数操作规范与技巧

对原始数据进行整理和分析，计算平均值、标准差等统计指标。根据需要绘制图表进行直观展示。结合实验目的和背景知识对结果进行解读，判断样本中目标物质的含量或活性。注意结果的合理性和可靠性分析。数据处理结果解读结果分析与解读

05ELISA应用实例

传染病诊断ELISA可用于检测各种病毒、细菌和寄生虫的抗体或抗原，如HIV、HBV、HCV、梅毒等。自身免疫性疾病诊断通过检测患者血清中自身抗体，如类风湿因子、抗核抗体等，辅助诊断自身免疫性疾病。肿瘤标志物检测利用ELISA方法检测肿瘤相关抗原或抗体，实现肿瘤的早期发现、诊断和预后评估。医学诊断领域应用

123在药物研发过程中，ELISA可用于筛选