一种基于猪流行性腹泻病毒S1蛋白的单域抗体的阻断ELISA方法及其评价.pdfVIP

生物工程学报马志倩等/一种基于猪流行性腹泻病毒S1蛋白的单域抗体的阻断ELISA方法及其评价3221

ChineseJournalofBiotechnology

/cjbcnSep.25,2021,37(9):3221-3230

DOI:10.13345/j.cjb.200789©2021ChinJBiotech,Allrightsreserved

·动物及兽医生物技术·

S1

ELISA

1*2*11111

马志倩，白鸽，王天宇，李志伟，李洋，肖书奇，李爽

1西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100

2渭南市动物疫病预防控制中心，陕西渭南714000

马志倩,白鸽,王天宇,等.一种基于猪流行性腹泻病毒S1蛋白的单域抗体的阻断ELISA方法及其评价.生物工程学报,

2021,37(9):3221-3230.

MaZQ,BaiG,WangTY,etal.DevelopmentofablockingELISAbasedonasingle-domainantibodytargettheS1proteinof

porcineepidemicdiarrheavirus.ChinJBiotech,2021,37(9):3221-3230.

摘要:文中旨在利用猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)S1蛋白生物素化纳米抗体建立

一种阻断酶联免疫吸附试验(Blockingenzyme-linkedimmunosorbentassay，bELISA)方法，用于检测猪体内PEDV

抗体水平及疫苗免疫效果的评估。对PEDVS1蛋白的特异性单域抗体(Single-domainantibodies，sdAb)sdAb3

基因进行扩增，并在3′端融合Avitag序列，构建至原核表达载体pET21b，进行sdAb3-Avitag蛋白诱导表达纯化。

对纯化的sdAb3-Avitag融合蛋白进行生物素标记并鉴定其活性。以PEDV重组S1蛋白为抗原，通过对各反应条

件进行摸索与优化，建立一种可靠灵敏的bELISA方法应用于血清样品检测，并与商品化试剂盒检测进行比价。

成功构建重组载体pET21b-sdAb3-Avitag并诱导表达出sdAb3-Avitag蛋白。体外生物素标记的sdAb3(sdAb3-Biotin)

具有良好的活性。所构建的bELISA方法中，最适参数为：S1蛋白的包被浓度200ng/孔；血清稀释比例1︰2，

血清孵育时间2h；sdAb3-Biotin稀释比1︰8000，孵育时间30min；酶标抗体稀释比例1︰5000，反应时间30min。

所建立的方法与猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等主要猪源病毒的阳性血清均无交叉反应，具有

良好的特异性和重复性。利用建立的bELISA方法对临床54份猪血清样品进行检测，结果显示，该方法与商品

化试剂盒检测结果具有92.56%的总体符合率。文中建立了一种省时可靠的bELISA方法，可用于PEDV的临床

监测和疫苗免疫效果评估。

:猪流行性腹泻病毒，生物素化单域抗体，阻断ELSIA，S1蛋白

Received:December11,2020;Accepted:March25,2021

Supportedby:NationalKeyResearchandDevelopmentProgramofChina(No.2017YFD0500605),Ke