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探究温度对酶活性的影响 一、探究目的 通过检验不同温度下唾液淀粉酶和脲酶的活性，了解温度对酶活性的影响。二、探究原理 酶的催化作用受温度的影响很大，一方面与一般化学反应一样，提高温度可以增加酶促反应的速度。通常温度每升高 10℃，反应速度加快一倍左右，最后反应速度达到最大值。另一方面酶的化学本质是蛋白质，温度过高可引起蛋白质变性，导致酶的失活。因此，反应速度达到最大值以后，随着温度的升高，反应速度反而逐渐下降，以至完全停止反应。反应速度达到最大值时的温度称为某种酶作用的最适温度。高于或低于最适温度时，反应速度逐渐降低。大多数动物酶的最适温度为 37℃一 40℃，植物酶的最适温度 50℃一 60℃。但是，一种酶的最适温度不是完全固定的，它与作用的时间长短有关，反应时间增长时，最适温度向数值较低的方向移动。通常测定酶的活性时，在酶反应的最适温度下进行。为了维持反应过程中温度的恒定，一般利用恒温水浴等恒温装置。 酶对温度的稳定性与其存在形式有关。已经证明大多数酶在干燥的固体状态下比较稳定，能在室温下保存数月以至一年。溶液中的酶，一般不如固体的酶稳定，而且容易为微生物污染，通常很难长期保存而不丧失其活性，在高温的情况下，更不稳定。 三、材料和用具 1、含 0.3%氯化钠的 0.2%的淀粉溶液。 2、稀释 200 倍的唾液。 3、碘化钾-碘溶液：将碘化钾 20 克和碘 10 克溶解在 100ml 水中，使用前稀释 10 倍。 4、1%尿素溶液。 5、脲酶提取液：取黄豆粉 6 克，加 30%乙醇 250 毫升，振荡 10 分钟，过滤。可保存 l 一 2 星期。 6、奈斯勒(Nessler)试剂：称取 5 克碘化钾，溶于 5 毫升蒸馏水中，加人饱和氯化汞溶液(100 毫升约溶解 5.7 克氯化汞)，并不断搅拌。直至产生的朱红沉 淀不再溶解时，再加 40 毫升 50%氢氧化钠溶液，稀释至 100 毫升，混匀，静置过夜，倾出清液存于棕色瓶中。 四、探究步骤 1、温度对唾液淀粉酶活性的影响. A、原理： 唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小分子的糊精及麦芽糖。它们遇碘各呈不同的颜色。直链淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈蓝色；糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色。由于在不同温度下唾液淀粉酶的活性高低不同，则淀粉被水解的程度不同， 所以，可由酶反应混合物遇碘所呈现的颜色来判断。 B、步骤： 取 3 支试管，编号后各加入淀粉溶液 2 毫升。将第 l、2 号试管放入 37℃恒温水浴中保温，第 3 号试管放入冰水中冷却，5 分钟后，向第 l 号试管中加人煮沸 5 一 15 分钟的稀释唾液 l 毫升；向第 2、3 号试管加稀释唾液各 l 毫升。摇匀， 20 分钟后取出 3 支试管，各加碘化钾-碘溶液 2 滴，混匀，比较各管溶液的颜色。判断淀粉被唾液酶水解的程度，井说明温度对唾液酶活性的影响。 2、温度对脲酶活性的影晌A、原理： 脲酶能催化尿素水解生成氨和二氧化碳，氨可与奈斯勒试剂作用生成橙红色化合物。由颜色深浅，可断定反应进行的程度。 B、步骤： 各取 4 支试管，编号。向每支试管中，各加人脲酶提取液 l 毫升。将第 l 号试管放在冰水里冷却，第 2 号试管在室温下放置，第 3 号试管在 50℃恒温水浴中保温，第 4 号试管在沸水浴中。5 分钟后向 4 支试管中各加人 l%尿素溶液 l 毫升。混匀，10 分钟后取出 4 支试管，将第 3、4 号试管用流动的自来水冷却至室温。然后，向4 支试管中各加奈斯勒试剂 5 滴，摇匀。观察比较各试管颜色深浅，并说明温度对脲酶活性的影响。