（大蒜）根尖微核检测记录表 - 湖州师范学院.PPT.pptxVIP

湖州师范学院 生命科学学院生物系 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 实验九 诱变剂的微核测试 1 、 了解细胞微核形成的机理及其 形态特点， 2 、 学习植物根尖细胞的微核检测 技术。 一 、 实验目的 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 ※ 微核(micronuclei)简称MCN ， 是真核类生物 细胞中的一种异常结构 ， 往往是细胞经辐射或 化学药物的作用而产生的 。在细胞间期 ， 微核 呈圆形或椭圆形 ， 游离于主核之外 ， 大小应在 主核1/3以下 。微核的折光率及细胞化学反应性 质和主核一样 ， 也具合成DNA的能力。 ※微核形成 :有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断 片不能向两极移动 ， 游离于细胞质中 ， 在间期 细胞核形成时 ， 在核产生一到几个很小的圆形 结构 — 微核 ， 直径大约是细胞直径的1/20～1/5。 二 、 实验原理 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 微 核 微核 微核 微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应 呈正相关 ， 因此 ， 微核是常用的遗传毒理学指 标之一 ， 指示染色体或纺锤体的损伤 。微核测 试已用于辐射损伤 、辐射防护 、化学诱变剂、 新药试验 、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等 各方面。 二 、 实验原理 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 显微镜 、恒温培养箱 、恒温水浴锅 、 镊子 、载玻片及盖玻片等。 盐酸 、 甲醇 、石炭酸品红 、 秋水仙素 （硫酸铜 、重铬酸钾） 。 三 、 实验材料 大蒜或蚕豆 四 、 实验仪器设备及药品 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 1 、幼根的培养 （ 1） 大蒜： 提前 3—5d进行培养 ， 将大蒜瓣剥去外 边膜质枯皮 ， 下端可见许多微微凸起的根原体， 将蒜瓣架在烧杯（大小与蒜瓣适宜） 口上 ， 杯中 盛满清水 ， 使蒜瓣的下部浸入水中 ， 置培养箱中， 注意每天换水 ， 经3—5d后 ， 即可长出1-2cm的嫩 根。 （2） 蚕豆： 浸种24h ， 期间换水2次 ， 25℃催芽， 36-48h生根1-2cm。 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 五 、 实验步骤 2 、 处理根尖： 阳性检测采用0 . 1%秋水仙素[0 . 1g/L硫酸铜 （大蒜） 、0 .5g/L重铬酸钾（蚕豆） ] ， 对照用自来水处 理 ， 处理时间24h ， 处理液浸没根尖。 3 、恢复培养： 处理后的根尖用自来水浸洗3次 ， 每次2- 3min ， 洗净后在水中恢复培养24h 。 4 、 固定： 切取1cm左右的根尖 ， 用甲醇： 冰醋酸（ 3： 1） 固定液固定24h后弃去固定液 ， 移入70％酒精中 ， 4℃冰 箱保存。 五 、 实验步骤 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 5 、酸解： 弃去固定液 ， 用蒸馏水漂洗2-3次， 吸净水 ， 加入6M盐酸浸没根尖 ， 于室温解离 10min（或者1N盐酸60℃8- 10min ） ， 弃去 盐酸 ， 漂洗根尖2-3次 ， 彻底洗净盐酸。 6 、 染色： 截下1-2mm长的根尖 ， 滴加适量的 石炭酸品红染液 ， 染色10min ， 加盖玻片 ， 压片观察 ， 记录有微核的细胞数目。 五 、 实验步骤 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 1 、微核形成与识别： 首先在低倍镜中找到 分生组织区细胞分散均匀 ， 分裂相较多的 部位 ， 再转高倍镜观察 ， 找到微核。 （ 1） 在主核大小的1/3以下 ， 并与主核分 离的小核。 （2） 小核着色与主核相当或稍浅。 （3） 小核形态为圆形 、椭圆形或不规则 型。 六 、 实验结果 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 1 、微核形成与识别 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 1 、微核形成与识别 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 2 1 3 36小时秋水仙素对大蒜根尖的影响 1—0 . 1%秋水仙素对大蒜根尖细胞的多倍体和微核 2—0 . 2%秋水仙素对大蒜根尖细胞的多倍体和微核 3 、4—0 .05%秋水仙素对大蒜根尖细胞的多倍体和微核 4 2 、微核千分率（ MCN‰ ） 每一处理观 察3个根尖 ， 每个根尖计数100个-300细胞， 统计其中含的细胞数 ， 计算平均数 ， 即为 该处理的微核千分率。 微核千分率（ MCN‰ ）= ×1000‰ 六 、 实验结果 《遗 传 学》省 级 精 品 课 程 各自观察的细 胞数或微核数 平均微千分率 蚕豆（大蒜） 根尖微核检测记录表 总